扶桑綿粉蚧（Phenacoccus solenopsis Tinsley）是一種嚴(yán)重危害棉花的重要入侵性害蟲,而班氏跳小蜂（Aenasius bambawalei Hayat）是其專性寄生性天敵,在扶桑綿粉蚧生物防治過程中具有較好的應(yīng)用潛力。昆蟲氣味結(jié)合蛋白（OBPs）是氣味分子和氣味受體之間的橋梁,能夠攜帶疏水性氣味分子穿過親水性淋巴液到達受體細(xì)胞,對氣味的特異性結(jié)合和選擇運輸上有著重要的研究意義,若能明確班氏跳小蜂氣味結(jié)合蛋白與配體的相互作用關(guān)系,將為篩選班氏跳小蜂寄主定位行為活性物質(zhì)提供理論依據(jù),也為扶桑綿粉蚧的生物防治提供綠色通道。為此,本課題以班氏跳小蜂為研究對象,在構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組的基礎(chǔ)上篩選并克隆出了5個AbamOBPs基因,完成AbamOBP50與AbamOBP1的表達與純化:測定了AbamOBP50與22種寄主揮發(fā)物的結(jié)合特性;利用熒光猝滅、圓二色譜及同源建模和分子對接分析了AbamOBP1與配基的相互作用關(guān)系;利用RNAi及Y型嗅覺儀初步篩選出了對班氏跳小蜂具有行為活性的物質(zhì)。主要研究結(jié)果如下:1、班氏跳小蜂AbamOBPs基因克隆、蛋白表達和純化通過RT-PCR技術(shù)成功... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

班氏跳小蜂AbamOBP50、AbamOBP41、AbamOBP1、AbamOBP47和AbamOBP43的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列

2-2 班氏跳小蜂 AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 和 AbamOBP1 基的 PCR 擴增Fig. 2-2 PCR amplification of AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 andAbamOBP1 genes from A.bambawalei2.4 班氏跳小蜂 AbamOBPs 原核表達將成功構(gòu)建的 pET30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 轉(zhuǎn)化到表達菌21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞中，分別涂布在含有 Kan 和 Amp 的 LB 平板上，37置培養(yǎng) 12h，挑斑搖菌送測檢驗，對測序正確的菌株進行蛋白誘導(dǎo)表達T30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 誘導(dǎo)條件設(shè)置為 37℃，220r/min 活化600在 0.4-0.8，加 IPTG 終濃度為 0.1mmol/L 的條件下誘導(dǎo) 4h 后，經(jīng) SDS-PAG測，在蛋白對應(yīng)大小位置處成功表達了目的融合蛋白（圖 2-2），而在對照組的

班氏跳小蜂氣味結(jié)合蛋白 OBPs 的結(jié)合特性分析 15kD 左右位置有一條帶。以 pET17b 為表達載體的含 AbamOBP1 的融合蛋白經(jīng) SDS-PAGE 檢測后發(fā)現(xiàn)分表達在沉淀中。將包涵體進行變性、復(fù)性、透析處理后，過 DE52 陰離子交和 QFF 強陰離子交換柱后獲得 AbamOBP1 純蛋白（圖 2 -2），經(jīng) SDS-PAGE顯示只在 15kD 左右位置有一條帶。獲得的純蛋白 AbamOBP50 純度較高，可用續(xù)的熒光競爭結(jié)合試驗。獲得的純蛋白 AbamOBP1 純度較高，可為后續(xù)的熒光及圓二色譜分析試驗。1 2 3 4 5 6 7

【參考文獻】：
期刊論文
[1]昆蟲氣味認(rèn)知的嗅覺神經(jīng)結(jié)構(gòu)及分子機制[J]. 那杰,白旭,郭瑞,那宇鵬,王丹,劉衛(wèi)娜.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2015(04)
[2]班氏跳小蜂對扶桑綿粉蚧的寄生效能[J]. 高原,黃建,王竹紅,溫玉琪,鐘順.  武夷科學(xué). 2014(00)
[3]班氏跳小蜂觸角及其上感器的掃描電鏡觀察[J]. 龍秀珍,高燕,曾憲儒,韋德衛(wèi),曾濤,于永浩.  環(huán)境昆蟲學(xué)報. 2013(03)
[4]班氏跳小蜂對扶桑綿粉蚧的寄生功能反應(yīng)[J]. 黃俊,呂要斌,張娟,黃芳,貝亞維.  昆蟲學(xué)報. 2012(12)
[5]班氏跳小蜂個體發(fā)育研究[J]. 何佳,許再福.  環(huán)境昆蟲學(xué)報. 2012(04)
[6]扶桑綿粉蚧寄生性天敵班氏跳小蜂生物學(xué)研究[J]. 黃玲,劉慧,肖鐵光,周社文.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2011(06)
[7]昆蟲對氣味信息素的感受機制[J]. 劉召,花保禎.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(11)
[8]吡蚜酮與牛血清白蛋白的相互作用[J]. 徐巍,吳霞,周海平,劉瀟彧,楊景和,范金勇,張梅鳳.  高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報. 2009(11)
[9]野桑蠶性信息素結(jié)合蛋白基因pbp1、氣味受體基因or1和or3的克隆及其與家蠶同源基因的進化分析[J]. 張升祥,徐世清,孔令斐,司馬楊虎,崔為正.  昆蟲學(xué)報. 2009(08)
[10]廣州扶桑上發(fā)現(xiàn)扶桑綿粉蚧[J]. 馬駿,胡學(xué)難,劉海軍,梁帆,趙菊鵬,馮黎霞,陳乃中.  植物檢疫. 2009(02)

碩士論文
[1]班氏跳小蜂寄主定位的嗅覺機制[D]. 聶曉培.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]松褐天牛腫腿蜂的寄主定位機制[D]. 周長祥.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]松褐天牛氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 王娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]扶桑綿粉蚧寄生性天敵的優(yōu)勢種—班氏跳小蜂寄生特性的研究[D]. 杜亮.浙江農(nóng)林大學(xué) 2014
[5]扶桑綿粉蚧對棉花揮發(fā)物影響的研究及其生殖方式的研究[D]. 趙奕曼.浙江農(nóng)林大學(xué) 2014



本文編號：2991916