扶桑綿粉蚧（Phenacoccus solenopsis Tinsley）是一種嚴(yán)重危害棉花的重要入侵性害蟲,而班氏跳小蜂（Aenasius bambawalei Hayat）是其專性寄生性天敵,在扶桑綿粉蚧生物防治過程中具有較好的應(yīng)用潛力。昆蟲氣味結(jié)合蛋白（OBPs）是氣味分子和氣味受體之間的橋梁,能夠攜帶疏水性氣味分子穿過親水性淋巴液到達(dá)受體細(xì)胞,對氣味的特異性結(jié)合和選擇運(yùn)輸上有著重要的研究意義,若能明確班氏跳小蜂氣味結(jié)合蛋白與配體的相互作用關(guān)系,將為篩選班氏跳小蜂寄主定位行為活性物質(zhì)提供理論依據(jù),也為扶桑綿粉蚧的生物防治提供綠色通道。為此,本課題以班氏跳小蜂為研究對象,在構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組的基礎(chǔ)上篩選并克隆出了5個(gè)AbamOBPs基因,完成AbamOBP50與AbamOBP1的表達(dá)與純化:測定了AbamOBP50與22種寄主揮發(fā)物的結(jié)合特性;利用熒光猝滅、圓二色譜及同源建模和分子對接分析了AbamOBP1與配基的相互作用關(guān)系;利用RNAi及Y型嗅覺儀初步篩選出了對班氏跳小蜂具有行為活性的物質(zhì)。主要研究結(jié)果如下:1、班氏跳小蜂AbamOBPs基因克隆、蛋白表達(dá)和純化通過RT-PCR技術(shù)成功... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

班氏跳小蜂AbamOBP50、AbamOBP41、AbamOBP1、AbamOBP47和AbamOBP43的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列

2-2 班氏跳小蜂 AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 和 AbamOBP1 基的 PCR 擴(kuò)增Fig. 2-2 PCR amplification of AbamOBP50、AbamOBP47、AbamOBP43、AbamOBP41 andAbamOBP1 genes from A.bambawalei2.4 班氏跳小蜂 AbamOBPs 原核表達(dá)將成功構(gòu)建的 pET30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞中，分別涂布在含有 Kan 和 Amp 的 LB 平板上，37置培養(yǎng) 12h，挑斑搖菌送測檢驗(yàn)，對測序正確的菌株進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)T30a-AbamOBP50 和 pET17b-AbamOBP1 誘導(dǎo)條件設(shè)置為 37℃，220r/min 活化600在 0.4-0.8，加 IPTG 終濃度為 0.1mmol/L 的條件下誘導(dǎo) 4h 后，經(jīng) SDS-PAG測，在蛋白對應(yīng)大小位置處成功表達(dá)了目的融合蛋白（圖 2-2），而在對照組的

班氏跳小蜂氣味結(jié)合蛋白 OBPs 的結(jié)合特性分析 15kD 左右位置有一條帶。以 pET17b 為表達(dá)載體的含 AbamOBP1 的融合蛋白經(jīng) SDS-PAGE 檢測后發(fā)現(xiàn)分表達(dá)在沉淀中。將包涵體進(jìn)行變性、復(fù)性、透析處理后，過 DE52 陰離子交和 QFF 強(qiáng)陰離子交換柱后獲得 AbamOBP1 純蛋白（圖 2 -2），經(jīng) SDS-PAGE顯示只在 15kD 左右位置有一條帶。獲得的純蛋白 AbamOBP50 純度較高，可用續(xù)的熒光競爭結(jié)合試驗(yàn)。獲得的純蛋白 AbamOBP1 純度較高，可為后續(xù)的熒光及圓二色譜分析試驗(yàn)。1 2 3 4 5 6 7

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]松褐天牛腫腿蜂的寄主定位機(jī)制[D]. 周長祥.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]松褐天牛氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 王娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]扶桑綿粉蚧寄生性天敵的優(yōu)勢種—班氏跳小蜂寄生特性的研究[D]. 杜亮.浙江農(nóng)林大學(xué) 2014
[5]扶桑綿粉蚧對棉花揮發(fā)物影響的研究及其生殖方式的研究[D]. 趙奕曼.浙江農(nóng)林大學(xué) 2014



本文編號：2991916