木霉（Trichoderma）是真菌中重要的生物防治菌之一。本文以從土壤中分離獲得的具有抑菌作用的鉤狀木霉（Trichoderma hamatum）為研究對象,采用比較基因組學和蛋白組學等方法,分析差異基因和差異表達蛋白,探索該鉤狀木霉菌產生抑菌作用的機理,并通過實時熒光定量PCR對差異基因表達進行驗證。主要的研究結果如下：1.從致病菌區(qū)土壤中分離與鑒定出對煙草青枯病有生物防治效果的鉤狀木霉菌株YYH13和無生物防治效果的YYH16。YYH13代謝產物和發(fā)酵液對青枯雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）有明顯的抑制作用,發(fā)酵液在80℃以內能保持抑菌活性,120h的發(fā)酵液抑菌效果最好。田間試驗進一步驗證了YYH13菌劑對煙草青枯病有較好的防治作用。2.采用硫酸銨沉淀法從發(fā)酵液中分離得到具有抑菌活性的蛋白質組分,SDS-PAGE法分析YYH16和YYH13發(fā)酵液的差異蛋白,確定差異蛋白的分子量范圍為80-100 kDa、40-50 kDa和20-30 kDa。用LC-MS/MS初步鑒定出125個差異蛋白質。以Mascot庫為基準,從8個蛋白質片段中篩選到與生物防治密切相關... 

【文章來源】：湖南農業(yè)大學湖南省

【文章頁數】：124 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１部分篩選的菌株??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｅｌｅｃ化ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??

第二章鉤狀木霉生物防治菌株的篩選與盜定??屬于無性階段，這符合半知菌亞口的特征，可確定屬于半知菌亞口。而且篩選菌??株的菌絲體發(fā)達，分生抱子梗上形成分生抱子可確定其屬于絲抱目（圖２－３Ｂ）。通??過掃描電鏡觀察，菌株的菌絲體是正直和縱橫交錯的分支（圖２－３Ａ）。參考民ｉｆａ滬９１??和Ｂｉｓｓｅｔｔｔｗｗｉ種群分類系統(tǒng)初步鑒定篩選的生物防治活性菌株屬于木霉屬。??Ａ?Ｂ??ｍ?■?Ａ?ａ??Ｃ?Ｄ??（Ａ：ＹＹＨ１３；?Ｂ：ＹＹＨ１６；?Ｃ：ＹＹＨ１４；?Ｄ：ＹＹＨ０７）??圖２－２部分菌株形態(tài)觀察??Ｆｉｇ?２－２?Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ａ?Ｂ??（Ａ：菌絲；Ｂ：抱子）??圖２－３苗株掃描電鏡圖??Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃ怡ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．２分子鑒定??將篩選出的菌株進行ＩＴＳ?ＰＣ民擴增，測序結果顯示菌株的ＩＴＳ片段大小在??５６０ｂｐ－７２０ｂｐ之間。經Ｂｌａｓｔ比對顯示，篩選的菌株均屬于木霉屬。但通過構建系??統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現不同菌株間存在明顯的進化差異。??從圖２－５可知，篩選的菌株分為蘭類：其中ＹＹＨ０Ｋ?ＹＹＨ０２、ＹＹＨ０６、ＹＹＨ０９、??ＹＹＨ１３－２０、ＹＹＨ２２、ＹＹＨ２８、ＹＹＨ３０、ＹＹＨ３６?親緣關系較近，這?１６?株菌均與??７：片顯加誦（鉤狀木霉ＭＴＳ序列同源性最高，達９９％；而ＹＹＨ０８、ＹＹ監(jiān)１、ＹＹＨ２７??１３??

第二章鉤狀木霉生物防治菌株的篩選與盜定??屬于無性階段，這符合半知菌亞口的特征，可確定屬于半知菌亞口。而且篩選菌??株的菌絲體發(fā)達，分生抱子梗上形成分生抱子可確定其屬于絲抱目（圖２－３Ｂ）。通??過掃描電鏡觀察，菌株的菌絲體是正直和縱橫交錯的分支（圖２－３Ａ）。參考民ｉｆａ滬９１??和Ｂｉｓｓｅｔｔｔｗｗｉ種群分類系統(tǒng)初步鑒定篩選的生物防治活性菌株屬于木霉屬。??Ａ?Ｂ??ｍ?■?Ａ?ａ??Ｃ?Ｄ??（Ａ：ＹＹＨ１３；?Ｂ：ＹＹＨ１６；?Ｃ：ＹＹＨ１４；?Ｄ：ＹＹＨ０７）??圖２－２部分菌株形態(tài)觀察??Ｆｉｇ?２－２?Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??Ａ?Ｂ??（Ａ：菌絲；Ｂ：抱子）??圖２－３苗株掃描電鏡圖??Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃ怡ｄ?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．２分子鑒定??將篩選出的菌株進行ＩＴＳ?ＰＣ民擴增，測序結果顯示菌株的ＩＴＳ片段大小在??５６０ｂｐ－７２０ｂｐ之間。經Ｂｌａｓｔ比對顯示，篩選的菌株均屬于木霉屬。但通過構建系??統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現不同菌株間存在明顯的進化差異。??從圖２－５可知，篩選的菌株分為蘭類：其中ＹＹＨ０Ｋ?ＹＹＨ０２、ＹＹＨ０６、ＹＹＨ０９、??ＹＹＨ１３－２０、ＹＹＨ２２、ＹＹＨ２８、ＹＹＨ３０、ＹＹＨ３６?親緣關系較近，這?１６?株菌均與??７：片顯加誦（鉤狀木霉ＭＴＳ序列同源性最高，達９９％；而ＹＹＨ０８、ＹＹ監(jiān)１、ＹＹＨ２７??１３??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長枝木霉TlCC鑒定及其生物學特性研究[J]. 王斌,Ali Khatib Bakar,劉金亮,張世宏,潘洪玉.  中國農學通報. 2011(05)
[2]哈茨木霉高產幾丁質酶菌株的篩選及產酶條件研究[J]. 王紅梅,蔣立科,陶芳,魏練平,岳永德.  浙江大學學報(農業(yè)與生命科學版). 2010(02)
[3]里氏木霉纖維二糖水解酶Ⅱ在畢赤酵母中的高效表達[J]. 張煜,劉剛,余少文,湯新,邢苗.  菌物學報. 2005(03)
[4]綠色木霉TR-8菌株的生物學特性研究[J]. 紀明山,李博強,許遠,時越,谷祖敏,陳捷.  沈陽農業(yè)大學學報. 2004(03)
[5]應用木霉制劑防治幾種藥用植物病害的研究[J]. 丁萬隆,程惠珍,陳君.  中國中藥雜志. 2003(01)



本文編號：2917588