發(fā)布時間：2020-08-31 09:54

　　 黃瓜細菌性角斑病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)和黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是危害葫蘆科作物的兩種常見病原物;李屬壞死環(huán)斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是核果類果樹的重要病原物。其中,黃瓜綠斑駁花葉病毒、李屬壞死環(huán)斑病毒、李痘病毒是我國出入境檢疫性有害生物。隨著國內(nèi)、國際貿(mào)易的迅猛發(fā)展,檢疫性病原物進入我國的風(fēng)險逐漸提高�；诖�,本研究針對上述四種病原物,利用交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù)和重組酶聚合酶等溫擴增技術(shù)建立了快速準確的病原物檢測方法,主要結(jié)果如下:1.建立黃瓜細菌性角斑病菌交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù)根據(jù)黃瓜細菌性角斑病菌的甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因,設(shè)計并篩選特異性引物,建立了黃瓜細菌性角斑病菌交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù),可區(qū)分黃瓜細菌性角斑病菌和13種常見的假單胞及其他菌屬致病菌,檢測限為0.54×10~3 CFU/mL。2.建立黃瓜綠斑駁花葉病毒交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù)根據(jù)黃瓜綠斑駁花葉病毒基因組中3'端外殼蛋白基因序列,設(shè)計并篩選特異性引物,建立了黃瓜綠斑駁花葉病毒交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù),可區(qū)分黃瓜綠斑駁花葉病毒和其他5種葫蘆科作物常見病毒(黃瓜花葉病毒、辣椒輕斑駁病毒、煙草花葉病毒、番茄花葉病毒、小西葫蘆黃花葉病毒),檢測限為24.3 ng/μL總RNA。3.建立李屬壞死環(huán)斑病毒交叉引物恒溫擴增檢測技術(shù)根據(jù)李屬壞死環(huán)斑病毒外殼蛋白基因序列,設(shè)計并篩選特異性引物,建立了李屬壞死環(huán)斑病毒交叉引物恒溫擴展檢測技術(shù),可區(qū)分李屬壞死環(huán)斑病毒和李屬植物的其他常見病毒(李痘病毒、蘋果花葉病毒、南芥菜花葉病毒)及類病毒(蘋果銹果類病毒、桃潛隱花葉類病毒),檢測限為72個拷貝。4.建立李痘病毒重組酶聚合酶恒溫擴增檢測技術(shù)根據(jù)李痘病毒全基因組中外殼蛋白基因序列設(shè)計并篩選特異性引物,建立了李痘病毒重組酶聚合酶恒溫擴增檢測技術(shù),可以區(qū)分李痘病毒與其他3種馬鈴薯Y屬病毒(馬鈴薯Y病毒、馬鈴薯A病毒、小西葫蘆黃花葉病毒),以及常見的李屬植物病毒(李屬壞死環(huán)斑病毒、蘋果花葉病毒、南芥菜花葉病毒)與類病毒(蘋果銹果類病毒、桃潛隱花葉類病毒),檢測限為0.53 ng/μL總RNA。本研究基于兩種恒溫擴增技術(shù),分別建立四種重要病原物的恒溫擴增檢測技術(shù)。這些檢測方法可以在恒溫條件下完成對目的核酸片段的擴增,具有快速、特異、靈敏度高、操作簡單等優(yōu)點,避免了常規(guī)檢測方法需要昂貴儀器、費時等缺點,在口岸檢疫和田間檢測中具有重要應(yīng)用價值,對于保護葫蘆科和李屬作物的生產(chǎn)具有重要意義。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S432.4
【部分圖文】：

第一章 引 言1.1 病原物概述1.1.1 黃瓜細菌性角斑病菌黃瓜細菌性角斑病病原菌為丁香假單胞黃瓜致病變種（Pseudomonas syringae pv.Lachrymans）(Olczakwoltman et al., 2007)。黃瓜細菌性角斑病菌基因組大小約為 6.5 Mb，包含一個環(huán)狀的染色體 DNA 和兩個單獨的質(zhì)粒 DNA(Buell et al., 2003)。該病菌為革蘭氏陰性菌，具有單極生鞭毛，菌體呈短桿狀，不耐酸，生長溫度喜 25-28℃，濕度喜 75%以上，最適酸堿度為 PH6.8(劉延英, 2003)。黃瓜細菌性角斑病是黃瓜生產(chǎn)上的重要病害之一，分布廣且為害嚴重，在世界各地均有發(fā)生(孫福在 et al., 1988; 張吉光 et al., 2010)。黃瓜細菌性角斑病菌可通過灌水、氣流、風(fēng)雨，昆蟲和農(nóng)事操作等由氣孔、傷口侵入寄主。種植密度過大時，農(nóng)事操作易使葉片摩擦造成傷口，因此，在溫暖多雨條件下的連作田極易發(fā)病(李寶棟 2001)。染病初期的植株葉片呈現(xiàn)黃色褪綠斑點，葉背病斑為水浸狀，染病后期在葉脈阻隔下病斑呈現(xiàn)不規(guī)則多邊形(圖 1.1)，之后病斑開裂，葉片干枯脫落(劉春艷 et al., 2010)。黃瓜細菌性角斑病菌癥狀與黃瓜霜霉病癥狀相似，在防治過程中極易混淆(蔡江文 et al., 2008; 王平 et al., 2012)。

論文 ，之后變成花葉，葉片凹凸不平，卷曲，并帶有濃綠色的（圖 1.2）。侵染后的西瓜種苗，果實表面有濃綠色圓斑，果浸狀，種子周圍果肉呈紫紅色水浸裝，果肉中黃色纖維明顯品質(zhì)下降，幾乎不能食用，同時產(chǎn)量嚴重下降，對瓜類作物V 隨著進口瓜類種子傳入我國，使得多個地區(qū)的葫蘆科作綠斑駁花葉病毒主要通過種子進行傳播，其他受污染的農(nóng)具瓜綠斑駁花葉病毒活力穩(wěn)定，移栽，授粉等農(nóng)事操作均可造有效的途徑是進行嚴格檢疫，切斷傳染源(鄭麗嬌 2010)。

圖 1.3 PNRSV 侵染玫瑰癥狀Fig. 1.3 Symptom of rose leaves infected by PNRSV(Salarejczak et al., 2005)毒Plum pox virus, PPV）屬于馬鈴薯 Y 病毒屬（Potyvirus），病毒粒子呈彎11 nm，病毒基因組含有一條單鏈 RNA，約 10,000 個寡核苷酸(Maiss2008)。李痘病毒是核果類果樹的重要危害病毒之一，可侵染杏、桃、其侵染的果樹葉片扭曲，出現(xiàn)褪綠環(huán)斑，葉脈黃化，果皮上出現(xiàn)環(huán)斑果實未成熟的時候大量脫落，產(chǎn)量降低，造成嚴重的經(jīng)濟損失(洪健 et 8)。自然條件下，李痘病毒會經(jīng)蚜蟲進行傳播，染病繁殖材料的運輸是原因(Wallis et al., 2005; 楊雷亮 et al., 2008)。李痘病毒目前在歐洲，

【參考文獻】

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本文編號：2808644