【摘要】：【目的】氣味結(jié)合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆蟲(chóng)寄主定位、產(chǎn)卵地選擇等行為中發(fā)揮重要作用,克隆與鑒定小菜蛾P(guān)lutella xylostella OBP基因、明確其與配體化合物的結(jié)合特性有助于闡明小菜蛾嗅覺(jué)識(shí)別的分子機(jī)制。【方法】利用PCR技術(shù)克隆小菜蛾OBP2,對(duì)獲得的編碼序列全長(zhǎng)進(jìn)行信號(hào)肽及跨膜區(qū)域預(yù)測(cè),用DNAMAN與其他昆蟲(chóng)的OBP2進(jìn)行多序列比對(duì),采用MEGA5.0鄰接法(neighbor-joining method,NJ)構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同發(fā)育階段和不同組織中的表達(dá)模式。構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET28aPxyl OBP2,進(jìn)行原核表達(dá)及蛋白純化。利用熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)Pxyl OBP2蛋白與39種配基化合物的結(jié)合特性進(jìn)行分析�！窘Y(jié)果】成功獲得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登錄號(hào):KT070562)的編碼序列全長(zhǎng),其完整開(kāi)放閱讀框大小為546 bp,編碼182個(gè)氨基酸,具有氣味結(jié)合蛋白典型的6個(gè)保守半胱氨酸結(jié)合位點(diǎn)。熒光定量PCR結(jié)果表明,發(fā)育表達(dá)模式顯示,Pxyl OBP2在未交配雄性成蟲(chóng)中的表達(dá)量均明顯高于雌性成蟲(chóng)和已交配雄蟲(chóng);組織表達(dá)模式顯示,Pxyl OBP2在足中的表達(dá)量高于其他組織。經(jīng)預(yù)測(cè)成熟蛋白大小為22.24 k Da,等電點(diǎn)5.69。SDS-PAGE結(jié)果顯示融合蛋白成功表達(dá)。熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)3種性信息素和36種植物揮發(fā)物結(jié)合發(fā)現(xiàn),Pxyl OBP2與性信息素Z-11-16:Ald可以結(jié)合,解離常數(shù)48.951μmol/L;可以和11種寄主植物揮發(fā)物有效結(jié)合,其中,與芳樟醇、正壬醇結(jié)合能力最強(qiáng),解離常數(shù)分別為4.733和6.861μmol/L�！窘Y(jié)論】本研究明確了Pxyl OBP2的核苷酸、氨基酸序列,并根據(jù)qRT-PCR和熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推斷Pxyl OBP2與小菜蛾雄蟲(chóng)尋求配偶有關(guān),且寄主揮發(fā)物芳樟醇、正壬醇起協(xié)同促進(jìn)作用。

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉一鵬;劉楊;楊婷;桂富榮;王桂榮;;小菜蛾普通氣味受體基因PxylOR9的鑒定及功能研究[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年05期

2 錢凱;馮波;巫詡亮;勞沖;沈幼蓮;杜永均;;松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及組織表達(dá)譜和原核表達(dá)研究[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年05期

3 張治科;吳圣勇;雷仲仁;;西花薊馬化學(xué)感受蛋白的cDNA克隆、時(shí)空表達(dá)分析及組織定位[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年01期

4 吉挺;沈芳;梁勤;吳黎明;劉振國(guó);羅岳雄;;中華蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表達(dá)及組織表達(dá)譜[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2014年08期

5 宋月芹;解幸承;董鈞鋒;仵均祥;;梨小食心蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白GmolOBP3的cDNA克隆、表達(dá)譜及結(jié)合特性分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2014年03期

6 陳玲;李紅亮;周宇翔;趙磊;張林雅;倪翠俠;商晗武;;桔小實(shí)蠅氣味結(jié)合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、組織表達(dá)及配基結(jié)合特性[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年06期

7 沈幼蓮;高揚(yáng);杜永均;;植物氣味化合物與斜紋夜蛾性信息素的協(xié)同作用[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2009年12期

【共引文獻(xiàn)】

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1 譚靜;陳玲;李紅亮;王強(qiáng);商晗武;;桔小實(shí)蠅雌雄蟲(chóng)對(duì)18種寄主揮發(fā)物的觸角電位差異比較[J];浙江農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年05期

2 馮波;郭前爽;毛必鵬;杜永均;;松墨天�；瘜W(xué)感受組織熒光定量PCR內(nèi)參基因的鑒定與篩選[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2016年04期

3 程小娟;蔡立君;鄭麗雙;覃江梅;黃宇萍;尤民生;;小菜蛾氣味結(jié)合蛋白OBP2基因的克隆、表達(dá)譜及其結(jié)合特性分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2016年04期

4 張治科;吳圣勇;雷仲仁;;西花薊馬氣味結(jié)合蛋白的cDNA克隆、序列分析及時(shí)空表達(dá)[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年06期

5 王然;張曉曼;李峰奇;吳帆;李紅亮;羅晨;;煙粉虱MED隱種氣味結(jié)合蛋白OBP8的克隆、原核表達(dá)及與植物揮發(fā)物的結(jié)合特性[J];植物保護(hù)學(xué)報(bào);2016年01期

6 吳帆;黃君君;譚靜;唐明珠;李紅亮;;中華蜜蜂信息素結(jié)合蛋白OBP10的基因克隆、原核表達(dá)和配基結(jié)合特性分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2016年01期

7 賈小儉;郝少東;杜艷麗;張民照;覃曉春;王進(jìn)忠;王海香;冀衛(wèi)榮;;桃蛀螟性信息素結(jié)合蛋白Cpun-PBP1的cDNA克隆、表達(dá)譜及其與配體化合物的結(jié)合特性分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年11期

8 張秀歌;李祥;孫小旭;李思翰;董文霞;;植物揮發(fā)物對(duì)蛾類昆蟲(chóng)性信息素的影響[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年06期

9 汪宇;孫浩;朱家穎;趙寧;楊斌;;云南切梢小蠹?xì)馕督Y(jié)合蛋白的同源模建[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2015年05期

10 曾娟;杜永均;姜玉英;劉萬(wàn)才;;我國(guó)農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)性誘監(jiān)測(cè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用[J];植物保護(hù);2015年04期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 劉寧燦;張進(jìn);王桂榮;劉楊;嚴(yán)善春;;棉鈴蟲(chóng)普通氣味受體基因HarmOR9和HarmOR29的克隆和組織表達(dá)分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2014年05期

2 孔暢儀;王桂榮;劉楊;嚴(yán)善春;;小菜蛾三個(gè)普通氣味受體基因的克隆及表達(dá)譜[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年09期

3 宋月芹;解幸承;董鈞鋒;仵均祥;;梨小食心蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白GmolOBP3的cDNA克隆、表達(dá)譜及結(jié)合特性分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2014年03期

4 劉程程;劉楊;張進(jìn);王桂榮;董雙林;;甜菜夜蛾觸角氣味受體基因OR18的克隆和表達(dá)定位[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年20期

5 樊建庭;孟俊國(guó);Baode Wang;趙莉藺;孫江華;;聚集性信息素和植物源信息素對(duì)松墨天牛的聯(lián)合誘捕作用[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年05期

6 魏丹;葉占峰;高建清;董雙林;;二化螟Minus-C氣味結(jié)合蛋白的分子克隆及功能鑒定[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年07期

7 紀(jì)萍;劉靖濤;谷少華;朱曉強(qiáng);張永軍;郭予元;;綠盲蝽氣味結(jié)合蛋白AlucOBP7的表達(dá)及氣味結(jié)合特性[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年06期

8 陳玲;李紅亮;周宇翔;趙磊;張林雅;倪翠俠;商晗武;;桔小實(shí)蠅氣味結(jié)合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、組織表達(dá)及配基結(jié)合特性[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年06期

9 李紅亮;張林雅;莊樹(shù)林;倪翠俠;韓寶瑜;商晗武;;中華蜜蜂普通氣味結(jié)合蛋白ASP2的氣味結(jié)合功能模式分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年01期

10 張瑤;張升祥;路國(guó)兵;徐世清;崔為正;;家蠶ABP與ABPX基因定位與表達(dá)分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2012年08期

【相似文獻(xiàn)】

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1 張小輝;朱忠珂;祁艷霞;;中華蜜蜂氣味結(jié)合蛋白5,9,11,12基因克隆及生物信息學(xué)分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2010年07期

2 朱家穎;楊璞;吳國(guó)星;和秋菊;尹立紅;熊忠平;;麗蠅蛹集金小蜂氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與序列分析[J];環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2010年04期

3 ;本期重點(diǎn)推介[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2012年05期

4 王桂榮,郭予元,吳孔明;昆蟲(chóng)觸角氣味結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2002年01期

5 吳少英,王桂榮,吳孔明,郭予元,原國(guó)輝,郭線茹;煙青蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與序列分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年09期

6 孫浩;趙雷修;周凡蕊;高慧;;紫色卷蛾氣味結(jié)合蛋白的同源模建[J];農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究;2013年04期

7 鐘濤;尹姣;劉懷;王進(jìn)軍;李克斌;韋永貴;曹雅忠;;草地螟觸角普通氣味結(jié)合蛋白基因的克隆及序列分析[J];植物保護(hù);2008年04期

8 劉剛;;棉鈴蟲(chóng)煙青蟲(chóng)分散產(chǎn)卵習(xí)性與氣味結(jié)合蛋白有關(guān)[J];農(nóng)藥市場(chǎng)信息;2012年11期

9 張升祥;徐世清;王更先;周曉玲;王桂花;崔為正;;家蠶普通氣味結(jié)合蛋白基因的表達(dá)及分子進(jìn)化研究[J];蠶業(yè)科學(xué);2010年04期

10 張瑤;張升祥;崔為正;;家蠶嗅覺(jué)相關(guān)蛋白質(zhì)的研究進(jìn)展[J];蠶業(yè)科學(xué);2008年02期

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2 范佳;Sophie Vandermoten;Frederic Francis;劉勇;陳巨蓮;程登發(fā);;特異結(jié)合EβF的氣味結(jié)合蛋白在蚜蟲(chóng)及其天敵等6種昆蟲(chóng)中的表達(dá)[A];植�？萍紕�(chuàng)新與病蟲(chóng)防控專業(yè)化——中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

3 范蔭蔭;李為爭(zhēng);原國(guó)輝;;昆蟲(chóng)嗅覺(jué)分子機(jī)理的研究進(jìn)展[A];華中昆蟲(chóng)研究（第八卷）[C];2012年

4 王滿V

本文編號(hào)：2734759