【摘要】：灰霉病是由葡萄孢屬真菌(Botrytis)及葡萄孢屬類似真菌(Botrytis-like)引起的一種世界性分布的真菌病害,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Amphobotrys是一種葡萄孢屬類似真菌,該屬真菌只有一個種,即Amphobotrys ricini(Buchw.)Hennebert,主要侵染大戟科植物,包括蓖麻、鐵莧菜、一品紅、虎刺梅和佛肚樹等。但是從Amphobotrys屬研究歷史及現(xiàn)狀可以看出,針對該類病菌病原學(xué)研究相對薄弱。因此本研究對Amphobotrys屬菌株分類屬性鑒定、遺傳多樣性、交配型檢測及交配型基因結(jié)構(gòu)和真菌病毒多樣性開展了研究,取得的主要研究結(jié)果如下:(1)明確了Amphobotrys在分類上屬于核盤菌科以及200個Amphobotrys菌株為同一個種,即A.ricini。完成了菌株WHA-1全基因組測序,基因組大小為34.99 Mbp,利用基因組中的1813個核心基因構(gòu)建了含15種真菌的系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果表明菌株WHA-1與其它7種核盤菌科真菌聚為一支�？梢娋闣HA-1在分類上屬于核盤菌科。200個Amphobotrys菌株菌落形態(tài)、菌絲生長速度、分生孢子和分生孢子梗形態(tài)與Amphobotrys ricini(Buchw.)Hennebert一致。對200個菌株的ITS、G_3PDH、HSP_(60)以及RPB_2這4個基因進(jìn)行測序,通過同源比對及構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,結(jié)果表明所有的菌株聚為一支。形態(tài)學(xué)與分子鑒定結(jié)果都表明200個菌株屬于同一個種,即A.ricini(Buchw.)Hennebert。(2)通過對82個A.ricini菌株進(jìn)行RAPD分析,表明A.ricini菌株具有豐富的遺傳多樣性。從50條RAPD引物中篩選出多態(tài)性強(qiáng)、重復(fù)性好的8條引物,對82個A.ricini菌株進(jìn)行了遺傳多樣性分析。結(jié)果顯示:8條引物共擴(kuò)增出63條DNA條帶,其中49條DNA條帶為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率為77.8%,多態(tài)性信息含量(PIC)值變化范圍在0.47~0.84之間,平均值為0.72。觀測等位基因數(shù)(Na)為2.0000、有效等位基因數(shù)(Ne)為1.3577、Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.2275和Shannon信息指數(shù)(I)為0.3631。聚類分析表明,遺傳相似系數(shù)變化范圍在0.4082~1.0000之間,在遺傳相似系數(shù)0.74處,可將82個供試菌株劃分為6個RAPD群。RAPD類群與菌株地理來源及寄主植物具有一定的相關(guān)性。(3)明確了A.ricini群體交配型分布規(guī)律及交配型基因結(jié)構(gòu)。檢測了200個A.ricini菌株的交配型,其中170個菌株為MAT 1-1型,占85%;21個為MAT 1-2型,占10.5%;9個為MAT 1-1/MAT 1-2型,占4.5%,在供試菌株中,MAT 1-1型是優(yōu)勢交配型。通過對A.ricini的MAT 1-1和MAT 1-2交配型基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)A.ricini整個MAT 1-1基因座長度為8226 bp,包含四個基因位點(diǎn):APN2(DNA lyase)、SLA2(cytoskeleton assembly control)、MAT 1-1-1、MAT 1-1-5,其中MAT 1-1-1編碼保守的Alpha domain;整個MAT 1-2基因座長度為11992 bp,包含五個基因位點(diǎn):APN2(DNA lyase)、SLA2(cytoskeleton assembly control)、MAT 1-2-1、MAT 1-2-4以及部分MAT 1-1-1基因序列(truncated MAT 1-1-1),其中MAT 1-2-1編碼保守的高遷移率蛋白盒子結(jié)構(gòu)域(HMG domain),可以編碼197個氨基酸。根據(jù)這一結(jié)果推測A.ricini有性繁殖可能為異宗配合。(4)分析了200個A.ricini菌株中真菌病毒的多樣性規(guī)律。采用高通量測序技術(shù)對200個菌株的總RNA進(jìn)行了測序,將拼接序列通過NCBI的Blastx進(jìn)行比對,共得到948條病毒序列,平均長度為1247 bp。依據(jù)核酸類型,將這些病毒序列分為正單鏈RNA病毒、負(fù)單鏈RNA病毒、雙鏈RNA病毒,其中+ssRNA病毒占88.1%,-ssRNA病毒占0.9%,dsRNA病毒占11%。通過RdRp系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)A.ricini群體中病毒種類共12個科和18個屬及幾個新的真菌病毒新類群,表明A.ricini群體中病毒類群比較豐富。設(shè)計(jì)兩條病毒特異引物對40個組的A.ricini菌株(5個菌株為一組)進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果表明87%的組都可以擴(kuò)增出病毒片段,說明這兩條病毒序列在A.ricini群體中分布比較廣泛。上述研究結(jié)果有助于認(rèn)識A.ricini群體結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性。
【圖文】：

蓖麻葡萄孢 Amphobotrys ricini 多樣性研究IV：菌絲生長速度為 3mm/d～5mm/d 的有 98 株，占 49%，V：菌絲生長速度小于 3 mm/d 的有 26 株，占 13%，具體情況見圖 2-2。

243.1.3 分生孢子大小和菌核大小的測定將 Amphobotrys 菌株接種于 PDA 平板上，并置于 20℃ 的生化培養(yǎng)養(yǎng) 20d 以進(jìn)行活化。用顯微鏡和肉眼觀察測量菌株分生孢子大小和菌核大果發(fā)現(xiàn)：不同菌株在 PDA 培養(yǎng)條件下，可以產(chǎn)生分生孢子且大小也存在異，但差異不大，分生孢子大小為 6.0～9.5μm；可以產(chǎn)生菌核，菌核大小大，范圍在（0.3～15.7）mm ×（1.0 - 28.5）mm。圖 2-3 PDA 培養(yǎng)基上 A. ricini 菌株的 5 類（I-V）菌落形態(tài)（20℃、15 d）Fig 2-3 Five types (I-V) of colony morphology of A. ricini on PDA at 20°C for 15
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S432.44

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2682465