【摘要】：朱砂葉螨(Tetranychus cinnabarinus)是一種世界性害螨,能夠危害多種農(nóng)業(yè)、經(jīng)濟(jì)作物,其防治具有十分重要的經(jīng)濟(jì)意義。目前,朱砂葉螨的防治主要以化學(xué)防治為主,而殺蟲殺螨劑的長期使用在導(dǎo)致嚴(yán)重抗性問題的同時(shí),還誘發(fā)了害蟲再猖獗現(xiàn)象。諸多研究表明亞致死劑量的菊酯類藥劑對(duì)靶標(biāo)生物的生殖力有積極的刺激作用。筆者所在實(shí)驗(yàn)室通過長期的抗性篩選獲得了朱砂葉螨甲氰菊酯抗性品系(FeR),且已經(jīng)證實(shí)該品系生殖力強(qiáng)于同源敏感品系(SS)。本研究以此為切入點(diǎn),重點(diǎn)研究導(dǎo)致FeR品系生殖力增強(qiáng)的分子機(jī)制,以期明確菊酯類藥劑導(dǎo)致害蟲再猖獗的原因。前期研究已發(fā)現(xiàn)FeR品系中卵黃原蛋白(Vitellogenin,vg)與卵黃原蛋白受體(Vitellogenin receptor,vgr)的基因水平及蛋白水平均高于SS,而昆蟲的卵黃發(fā)生過程是受保幼激素或蛻皮激素調(diào)控的,因此本研究主要從激素調(diào)控方面開展研究,主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.甲氰菊酯脅迫對(duì)朱砂葉螨生殖力影響的研究:通過使用亞致死劑量的甲氰菊酯分別對(duì)SS和FeR進(jìn)行脅迫,發(fā)現(xiàn)兩個(gè)品系產(chǎn)卵量均呈現(xiàn)顯著下降,表明亞致死劑量的甲氰菊酯對(duì)朱砂葉螨兩個(gè)品系均不存在刺激增殖的作用。2.朱砂葉螨保幼激素、蛻皮激素類型鑒定:利用GC-MS鑒定出在朱砂葉螨體內(nèi)存在保幼激素前體物質(zhì)MF(甲基法尼酯),但沒有檢測(cè)到保幼激素JHⅢ,MF滴度在兩品系5日齡成螨間不存在顯著性差異,表明保幼激素可能不是FeR品系生殖力增強(qiáng)的因素。使用昆蟲蛻皮激素酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測(cè)了朱砂葉螨體內(nèi)蛻皮激素總含量,發(fā)現(xiàn)在兩品系中5日齡成螨蛻皮激素含量均高于1日齡成螨和10日齡成螨,并且在1日齡成螨(1A)、5日齡成螨(5A)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),FeR品系蛻皮激素總量顯著高于同一時(shí)期的SS品系。朱砂葉螨體內(nèi)蛻皮激素含量變化趨勢(shì)與日均產(chǎn)卵量變化趨勢(shì)相一致,并且在FeR和SS間存在顯著差異,暗示著蛻皮激素可能是影響抗性品系生殖力增強(qiáng)的重要因素。3.蛻皮激素通路基因在FeR和SS間的表達(dá)差異及對(duì)產(chǎn)卵量的影響:通過對(duì)朱砂葉螨轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,篩選出了蛻皮激素合成通路的基因及蛻皮激素受體基因,分別為蛻皮激素合成通路基因TcNvd(Rieske domain protein)、TcSro(non glossy/shroud)、CYP307A1(spook)、CYP302A1(disembodied)、CYP315A1(shadow)、CYP314A1(shade)和蛻皮激素受體基因EcR。檢測(cè)兩品系5日齡成螨中該7條基因的相對(duì)表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)有4條基因(TcSro、CYP315A1、CYP314A1、EcR)在抗性品系表達(dá)上調(diào)。對(duì)CYP314A1、EcR分別進(jìn)行RNAi研究,發(fā)現(xiàn)沉默EcR后,Tcvg1的相對(duì)表達(dá)量顯著降低61.26%,且單雌產(chǎn)卵量也顯著降低35.93%;CYP314A1被沉默后,Tcvg1的相對(duì)表達(dá)量降低了57.73%,蛻皮激素含量降低了36.59%,單雌產(chǎn)卵量顯著降低了34.48%。表明CYP314A1、EcR參與了朱砂葉螨的產(chǎn)卵過程,且蛻皮激素可以調(diào)控朱砂葉螨產(chǎn)卵行為。本論文研究結(jié)果表明,朱砂葉螨FeR生殖力的提高與亞致死劑量的甲氰菊酯脅迫無關(guān),是甲氰菊酯抗性產(chǎn)生的伴隨現(xiàn)象。朱砂葉螨的卵黃發(fā)生過程受蛻皮激素調(diào)控,相對(duì)SS品系,FeR品系蛻皮激素合成通路基因TcSro、CYP315A1和CYP314A1表達(dá)均顯著上調(diào),導(dǎo)致蛻皮激素含量升高,且FeR品系蛻皮激素受體基因EcR表達(dá)也顯著上調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致其體內(nèi)卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體含量顯著提高,該機(jī)制可能是導(dǎo)致FeR生殖力顯著增強(qiáng)的直接原因。
【圖文】：

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.2 朱砂葉螨總 RNA 提取結(jié)果RNA 樣品的質(zhì)量對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性有顯著影響，所以在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)之前，應(yīng)對(duì)提取得到的 RNA 樣本進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。具體步驟同第四章 1.4.2 小節(jié)。該實(shí)驗(yàn)采用 Trizol 法進(jìn)行朱砂葉螨總 RNA 提取，，并采用 Promega 公司的基因組去除試劑盒進(jìn)行處理，獲得了質(zhì)量較高的總 RNA，濃度 500~800 ng/μL，吸光度OD260/OD280=1.8。圖 4.1 所示為朱砂葉螨 5 日齡 SS 雌成螨和 5 日齡 FeR 雌成螨的總 RNA 提取電泳圖。由圖中可以看出所提取的 RNA 樣本純度和完整性均符合要求，可以用于后續(xù) qPCR 實(shí)驗(yàn)。1 2
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S433.7;S482.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2672523