【摘要】：長(zhǎng)期以來(lái)魚(yú)類(lèi)下腳料的利用極為簡(jiǎn)單和粗獷,不僅造成了環(huán)境污染,資源也未能得到充分利用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)篩選具有高效分解魚(yú)類(lèi)下腳料功能和消除土壤板結(jié)功能的菌種,并對(duì)其組合發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化,探索最佳的發(fā)酵條件,制備出含氮豐富、具有解磷解鉀功效的液體微生物肥料。本研究對(duì)從土壤、腐敗魚(yú)體、微生物肥料中分離到的54株菌進(jìn)行了單一發(fā)酵試驗(yàn)、解磷解鉀固氮試驗(yàn)、形態(tài)學(xué)觀(guān)察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)試驗(yàn),最終篩選了5株菌[溫和假單胞菌(Acidovorax temperans)、施氏假單胞菌(Pseudommonas stutzeri)、類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)、黑曲霉(Aspergillus niger)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)]用于發(fā)酵魚(yú)類(lèi)下腳料。在確定用于發(fā)酵的菌種后,分別對(duì)復(fù)合菌種擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、溫度、p H、轉(zhuǎn)速、接菌量進(jìn)行了單因素試驗(yàn)及部分因素正交試驗(yàn),最終確定發(fā)酵用菌的擴(kuò)大培養(yǎng)條件為:在復(fù)合培養(yǎng)基中(配方為,蛋白胨15 g/l、葡萄糖20 g/l、Mg SO40.03 g/l、Na Cl0.01g/l、K2HPO40.15 g/l),接入5%(v/v)的復(fù)合菌種液,調(diào)節(jié)p H=6.5,放置于溫度為30℃,轉(zhuǎn)速為140 r/min的搖床中進(jìn)行4-6 h培養(yǎng),即得擴(kuò)大培養(yǎng)液。發(fā)酵工藝的研究通過(guò)對(duì)料水比、溫度、p H、轉(zhuǎn)速、接菌量進(jìn)行單因素試驗(yàn)及部分因素正交試驗(yàn),最終確定發(fā)酵條件為,在料水比為1:7的發(fā)酵底物中,接入11%(v/v)的復(fù)合菌種液,調(diào)節(jié)p H=5.5,放置于溫度為30℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min的條件下培養(yǎng)7-8天,制備的發(fā)酵液總氮含量可以達(dá)到32.3 g/L,總磷含量達(dá)到13.4 g/L,總養(yǎng)分含量4%,達(dá)到復(fù)合微生物液體肥料的標(biāo)準(zhǔn)。發(fā)酵工藝放大試驗(yàn)以料水比為1:7、溫度為30℃條件下的發(fā)酵底物為研究基礎(chǔ),對(duì)7.5 L發(fā)酵罐、50 L、1噸發(fā)酵罐的轉(zhuǎn)速、接菌量及補(bǔ)料情況進(jìn)行探究,雖然發(fā)酵罐的容量不斷增大,但是轉(zhuǎn)速190 r/min、接菌量15%(v/v)、30 g/L葡萄糖補(bǔ)充量的結(jié)果具有一致性,并且1噸發(fā)酵罐得到的發(fā)酵液總氮含量達(dá)28.4 g N/L,總磷含量10.1 g/L,基本符合微生物液體肥料標(biāo)準(zhǔn);將得到的發(fā)酵液接種至有機(jī)磷、無(wú)機(jī)磷、阿須貝、硅酸鹽培養(yǎng)基中,30℃培養(yǎng)3-5天后發(fā)現(xiàn),發(fā)酵液中的菌株生長(zhǎng)效果良好,說(shuō)明發(fā)酵液具有解磷解鉀固氮效果。本研究得到的微生物液體肥料,一方面緩解了環(huán)境壓力,另一方面使魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵成為供給植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的肥料,而且具有緩解土壤板結(jié)問(wèn)題的潛在能力。在一定程度上克服了有機(jī)肥料生產(chǎn)周期長(zhǎng)、化肥殘留嚴(yán)重的問(wèn)題。對(duì)工農(nóng)業(yè)發(fā)展具有重要的意義。
【圖文】：

圖 2-1 菌株協(xié)同拮抗試驗(yàn)結(jié)果圖Fig 2.1 The result of together antagonism between bacteria同拮抗試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：FO2 對(duì)于其他菌具有明顯的拮抗效果(a 圖)抑制生長(zhǎng)；而其余 6 株菌均可共同生長(zhǎng) (b、c 圖)。以上試驗(yàn)結(jié)果，最終篩選確定用于魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵的菌株為：AO1、FO3、FS4 這 6 株菌。酵菌形態(tài)學(xué)觀(guān)察結(jié)果述篩選出的 6 株菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)和顯微鏡觀(guān)察，結(jié)果見(jiàn)圖 2-2 至 2-7

圖 2-1 菌株協(xié)同拮抗試驗(yàn)結(jié)果圖Fig 2.1 The result of together antagonism between bacteria抗試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：FO2 對(duì)于其他菌具有明顯的拮抗效果生長(zhǎng)；而其余 6 株菌均可共同生長(zhǎng) (b、c 圖)。試驗(yàn)結(jié)果，，最終篩選確定用于魚(yú)類(lèi)下腳料發(fā)酵的菌株為O3、FS4 這 6 株菌。形態(tài)學(xué)觀(guān)察結(jié)果選出的 6 株菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)和顯微鏡觀(guān)察，結(jié)果見(jiàn)圖 2-2 至abc
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S144

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本文編號(hào)：2563118