【摘要】：以茄鏈格孢菌為靶標(biāo)菌,采用平板對峙法和生長速率法對分離自藥用植物的221株放線菌進(jìn)行篩選,通過生理生化特征、培養(yǎng)特征、形態(tài)特征和基于16S rRNA基因序列的相似性分析對活性菌株的種屬進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明,抑菌率75%以上放線菌有3株,其中菌株3150被鑒定為環(huán)圈鏈霉菌(Streptomyces anulatus)的一個菌株,菌株3679被鑒定為氫化鏈霉菌(Streptomyces hydrogenans)的一個菌株,菌株4536被鑒定為鏈霉菌屬(Streptomyces sp.)菌株。薄層色譜分析結(jié)果顯示菌株3679代謝產(chǎn)物豐富且分離度好,進(jìn)一步分離可望得到具有較好生防作用的化合物。
【圖文】：

GTGATCCAGCCGCA-3')擴(kuò)增放線菌16SrＲNA。PCＲ擴(kuò)增條件:95℃預(yù)變性5min，1個循環(huán);95℃變性1min，55℃退火1min，72℃延伸2min，35個循環(huán);72℃延伸10min，1個循環(huán)。PCＲ產(chǎn)物送生工生物工程技術(shù)服務(wù)(上海)有限公司測序。將測得的序列利用EzTaxon在線比對軟件進(jìn)行物種的相似性搜索，用MEGA5．01軟件進(jìn)行序列比對并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定菌株的種屬。2結(jié)果2．1茄鏈格孢菌拮抗放線菌的篩選利用平板對峙法初篩得到18株拮抗放線菌。通過生長速率法對這18株放線菌發(fā)酵液進(jìn)行復(fù)篩，，當(dāng)發(fā)酵液稀釋20倍時抑菌率75%以上的有3株(圖1)，分別是菌株3679(抑菌率79．84%)、3150(抑菌率75．85%)、4536(抑菌率83．46%)。圖1菌株3150、3679、4536發(fā)酵液對茄鏈格孢菌的抑制Fig．1Inhibitionoffermentationbrothofstrains3150，3679，4536againstAlternariasolani對上述3株高活性放線菌的發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取，菌絲體用丙酮浸提，所得粗提物用薄層色譜法分析。結(jié)果(圖2)顯示，菌株3679的代謝產(chǎn)物較豐富，分離度較好。采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法對3株活性菌株發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物進(jìn)行檢測，將所得質(zhì)譜信息與計算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照分析發(fā)現(xiàn):菌株3679的提取物色譜峰分別為芳香烴類、酚類、酯類、脂肪酸類及含氮化合物，菌株3150、4536的提取物色譜峰較少。2．2拮抗放線菌菌株3150、3679、4536的鑒定在電子顯微鏡下觀察，3株菌株成熟孢子絲形成的孢子鏈均呈串珠狀，孢子為柱形，表面光滑無刺(圖3)，此特征為鏈霉菌屬的典型形態(tài)特征。在選定的8種培養(yǎng)基上，3株菌株都不產(chǎn)生可溶性色素，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、燕麥培養(yǎng)基、無機(jī)鹽淀粉瓊脂培養(yǎng)基上生長一般，在其他培養(yǎng)基上生長較好。菌株3150和3679的氣生菌絲顏色多為黃白色，菌株4536的氣生菌

范ň

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