發(fā)布時(shí)間：2019-10-22 23:02

【摘要】：酚氧化酶(phenoloxidase,PO)(EC 1.14.18.1)是一種廣泛存在于動(dòng)物、植物、昆蟲、微生物及人體內(nèi)的一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多亞基的含銅氧化還原酶,在昆蟲生理發(fā)育和內(nèi)源性免疫過程中具有重要作用,如昆蟲黑化、傷口愈合等。本課題組在前期研究中得到了編碼小菜蛾(Plutella xylostella L.)酚氧化酶原PxPPO1基因的mRNA,并研究了它在小菜蛾蟲體中的時(shí)空表達(dá)情況。本文在此基礎(chǔ)上通過染色體步移法,克隆得到了編碼小菜蛾酚氧化酶原的PxPPO1全基因,通過對(duì)PxPPO1基因的序列進(jìn)行分析,得到PxPPO1基因的內(nèi)含子和外顯子及其所在位置,計(jì)算了內(nèi)含子AT%含量、接頭、堿基大小等信息,這為深入研究該基因的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。本研究的主要內(nèi)容如下:1.通過對(duì)GenBank中搜索到的鱗翅目PPO1基因序列進(jìn)行比較,選取最保守序列設(shè)計(jì)引物,以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到一段包含內(nèi)含子在內(nèi)的基因序列。以得到的基因序列作為染色體步移法的引物模板,設(shè)計(jì)5′端上游3條嵌套式特異性引物,進(jìn)行5′側(cè)翼端擴(kuò)增。通過多次步移,將所得序列拼接后得到小菜蛾P(guān)xPPO1基因全序列,共計(jì)7202bp。2.通過在線分析軟件EMBOSS Needle和NCBI BLAST程序?qū)xPPO1基因序列分析,分析得出該序列含有12個(gè)外顯子和11個(gè)內(nèi)含子,其中4745bp的堿基為內(nèi)含子序列,5識(shí)擻幸桓，

本文編號(hào)：2551811