【摘要】：獲得高純度的總DNA是進行土壤微生物宏基因組學研究的基礎(chǔ),也是分析生物炭作為土壤改良劑對土壤菌群結(jié)構(gòu)影響的關(guān)鍵。由于生物炭對DNA中磷酸骨架的吸附作用,從添加生物炭的土壤中提取總DNA較為困難。為了尋找合適的提取混有生物炭的土壤總DNA的方法,本研究分別采用E.Z.N.A.Soil DNA Kit法(方法 1)、改良的E.Z.N.A.Soil DNA Kit法(方法 2)、SDS-玻璃珠法(方法 3)、Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 4)和改良的Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 5)對兩種類型的混有生物炭的土壤樣品進行總DNA的提取,并對提取的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳分析以及濃度和純度的測定。結(jié)果表明:5種方法均可從土壤中提取到DNA,并且DNA大小一致,條帶也比較單一。同時,采用不同的方法從兩種混合土樣中提取的DNA濃度范圍為3.22~37.80μg·g-1干土,且土樣1的DNA提取量明顯大于土樣2的DNA提取量。但是不同方法提取到DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量存在明顯差異,其中方法 3提取的DNA得率最高,兩種土樣分別為37.80μg·g-1干土和10.78μg·g-1干土,但是該方法提取的DNA純度最低,兩種土樣DNA的A260/A230值僅為0.664和0.684,A260/A280值小于1.6,說明提取產(chǎn)物中存在嚴重的蛋白質(zhì)和腐殖酸的污染,不能直接用于PCR擴增。而方法 2雖然提取的DNA得率相對較低,但純度最高,兩種土樣的A260/A280值分別為1.854和1.844,A260/A230值分別為1.857和1.663,說明蛋白質(zhì)和腐殖酸的去除較徹底,并且該方法是在商品化的試劑盒基礎(chǔ)上進行的改進,操作簡單、省時,重復(fù)性好。這些研究結(jié)果證明方法 2即改良的E.Z.N.A.Soil DNA Kit提取方法,提取到的DNA純度最高,是較為理想的混有生物炭土壤的DNA提取方法,可以滿足構(gòu)建宏基因組文庫的要求。
【作者單位】： 大連工業(yè)大學生物工程學院;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項項目(201303095)
【分類號】：S154.3

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5 Liqun Rao;Hua Yang;Guiyou Long;Qiming Wang;Qing Li;;A rapid method for the preparation of DNA binding proteins[A];中國生物化學與分子生物學會第十屆會員代表大會暨全國學術(shù)會議摘要集[C];2010年

6 方呈祥;張珞珍;陶天申;楊朝暉;;幾種不同構(gòu)型DNA的長期保存[A];全國第五屆冷凍干燥學術(shù)交流會論文集[C];1997年

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10 ;Genomic DNA Expression Library Construction of Deinococcus radiodurans[A];湖南省生理科學會2008年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2008年

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本文編號：2537027