【摘要】：皮蠹科(Dermestidae)隸屬鞘翅目(Coleoptera)皮蠹總科(Dermestoidea),是一類(lèi)重要的儲(chǔ)藏物害蟲(chóng),食性雜、繁殖力強(qiáng),危害嚴(yán)重。皮蠹科廣泛分布于世界各地,目前全世界已知1000多種,我國(guó)約有100余種。種類(lèi)準(zhǔn)確識(shí)別鑒定是害蟲(chóng)防治的基礎(chǔ),皮蠹科分類(lèi)以成蟲(chóng)形態(tài)研究為主,幼蟲(chóng)形態(tài)相似較難區(qū)別,由于形態(tài)研究對(duì)鑒定人員的分類(lèi)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)要求較高,實(shí)際工作中種類(lèi)鑒定困難較大。近年來(lái),快速發(fā)展的分子生物學(xué)技術(shù)為昆蟲(chóng)種類(lèi)的快速鑒定提供了新的方法,但皮蠹科昆蟲(chóng)的分子生物學(xué)研究仍處于初步階段,且目前的分子研究多集中于斑皮蠹屬(Trogoderma),也未有針對(duì)皮蠹科內(nèi)相關(guān)屬之間系統(tǒng)的分子進(jìn)化研究。本文為首次利用DNA條形碼技術(shù)對(duì)皮蠹科倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)進(jìn)行分類(lèi)研究。從DNA提取方法、PCR體系擴(kuò)增進(jìn)行試驗(yàn)探索,構(gòu)建皮蠹科分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,初步建立起皮蠹科基因條形碼數(shù)據(jù)庫(kù),以期利用DNA條形碼技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)皮蠹科害蟲(chóng)的快速分類(lèi)鑒定。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果包括:1.研究皮蠹科形態(tài)分類(lèi),分析重要種類(lèi)的鑒定特征,攝取各種的背、腹、側(cè)面高清圖輔助鑒定。2.優(yōu)化DNA提取方法,探索了不同預(yù)處理方法對(duì)DNA提取效果的影響。經(jīng)過(guò)預(yù)處理后,一定程度上減少了基因組DNA的斷鏈,DNA更易擴(kuò)增長(zhǎng)片段,且不同位點(diǎn)擴(kuò)增效果也較好,其中以9%Na Cl溶液3h預(yù)處理后的昆蟲(chóng)標(biāo)本,利用磁珠法所提DNA的質(zhì)量及PCR擴(kuò)增效果最佳。3.建立適宜的PCR擴(kuò)增體系。反應(yīng)體系中加入牛血清蛋白并增加Mg2+濃度,能提高PCR擴(kuò)增效率及條帶質(zhì)量。設(shè)計(jì)的4對(duì)外圍巢式引物以A5/A6擴(kuò)增效果最優(yōu),最佳退火溫度為49℃�；谛蛄蟹治鼋⒌�5對(duì)巢式PCR組合,均能適用于較低濃度DNA擴(kuò)增。4.COⅠ基因(細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ基因)序列分析。所獲皮蠹科COⅠ基因擴(kuò)增序列為前端357bp及后端609bp片段,分別進(jìn)行拼接校正、比對(duì),利用MEGA分析了各序列保守位點(diǎn)、變異位點(diǎn)、簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)、自裔位點(diǎn)、各數(shù)據(jù)組堿基組成、堿基頻率、氨基酸組成、密碼子使用情況,計(jì)算各物種間的遺傳距離及標(biāo)準(zhǔn)差,轉(zhuǎn)換與顛換比例。并對(duì)序列數(shù)據(jù)組系統(tǒng)發(fā)育信號(hào)進(jìn)行檢測(cè),證實(shí)序列非隨機(jī)數(shù)據(jù),可為下一步構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)提供依據(jù)保證。5.系統(tǒng)發(fā)育研究。采用最大簡(jiǎn)約法(MP)、最大似然法(ML)兩種建樹(shù)方法,對(duì)皮蠹科COⅠ前、后兩端序列組及其翻譯的氨基酸進(jìn)行分析,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。皮蠹科COⅠ基因后端序列片段所包含遺傳信息更豐富,構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)較少發(fā)生偏離,同形態(tài)分類(lèi)的一致性高于前端片段,更適于作為皮蠹科系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究。6.DNA條形碼初步構(gòu)建�；诟魑锓N間遺傳距離、NJ系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)、barcoding gap三方面對(duì)皮蠹科COⅠ基因前端序列進(jìn)行分析評(píng)價(jià),該片段完全符合DNA條形碼有效性的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),可達(dá)到種鑒定目的。利用所獲的該段基因初步構(gòu)建了皮蠹科3屬的DNA條形碼。
【圖文】：

第一章 引 言 皮蠹科 DNA 條碼分類(lèi)技術(shù)研究族增加了 Ctesiini，其他同 Zhantiev[8]。Zhantiev[8]基于皮蠹科成蟲(chóng)、幼蟲(chóng)及蛹的 36 個(gè)形態(tài)特征，構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，如圖 1-1。Háva[9]較 Zhantiev[8]包含了更多已更新的種屬，分析其 4 亞科內(nèi) 11 個(gè)主要族群的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系如圖 1-2。 Háva[9]認(rèn)為 Trinodini 和 Trichelodini（分支 4、5）與Attagenini、Egidyellini、Anthrenini、Megatomini、Thylodriadini（分支 6~10）在分類(lèi)特征上差異較顯著，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，應(yīng)當(dāng)分為兩個(gè)不同亞科。而 Zhantiev[8]將 Trinodini、Trichelodini 與 Anthrenini 聚為一支，，列入了同一亞科。

Attagenini、Egidyellini、Anthrenini、Megatomini、Thylodriadini（分支 6~10）在分類(lèi)特征上差異較顯著，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，應(yīng)當(dāng)分為兩個(gè)不同亞科。而 Zhantiev[8]將 Trinodini、Trichelodini 與 Anthrenini 聚為一支，列入了同一亞科。圖 1-1 皮蠹科 11 族形態(tài)學(xué)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分支圖（Zhantiev，2000）[8]注：分支末端各族名均略寫(xiě)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S433.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 高秋月;景奉香;李海燕;陳季武;金慶輝;趙建龍;;基于磁珠的細(xì)菌基因組DNA快速提取方法[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年21期

2 李建鋒;;RAPD技術(shù)在昆蟲(chóng)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2011年01期

3 徐來(lái)祥,張知彬,宋銘晶,曹小平,王福生,張春光;福爾馬林保存的動(dòng)物標(biāo)本基因組DNA的提取方法[J];動(dòng)物學(xué)報(bào);2002年02期

4 樸美花,陳學(xué)新,何俊華;膜翅目昆蟲(chóng)干標(biāo)本的基因組DNA提取[J];動(dòng)物分類(lèi)學(xué)報(bào);2002年04期

5 楊倩倩;李志紅;伍yN;柳麗君;;線(xiàn)粒體COⅠ基因在昆蟲(chóng)DNA條形碼中的研究與應(yīng)用[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2012年06期

6 王憲輝,徐洪富,許永玉;昆蟲(chóng)分子生物學(xué)的一些研究進(jìn)展[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2001年01期

7 岳巧云;邱德義;黃藝文;劉國(guó)雄;;DNA條形碼技術(shù)在未知昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)種類(lèi)鑒定中的應(yīng)用[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2011年03期

8 劉聰;蔣湘;班麗萍;;斑皮蠹屬害蟲(chóng)鑒別方法研究進(jìn)展[J];植物檢疫;2012年04期

9 張生芳,劉永平;暗褐毛皮蠹的發(fā)現(xiàn)及其近緣種的比較[J];植物保護(hù);1985年05期

本文編號(hào)：2519697