【摘要】：皮蠹科(Dermestidae)隸屬鞘翅目(Coleoptera)皮蠹總科(Dermestoidea),是一類重要的儲(chǔ)藏物害蟲,食性雜、繁殖力強(qiáng),危害嚴(yán)重。皮蠹科廣泛分布于世界各地,目前全世界已知1000多種,我國約有100余種。種類準(zhǔn)確識(shí)別鑒定是害蟲防治的基礎(chǔ),皮蠹科分類以成蟲形態(tài)研究為主,幼蟲形態(tài)相似較難區(qū)別,由于形態(tài)研究對鑒定人員的分類知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)要求較高,實(shí)際工作中種類鑒定困難較大。近年來,快速發(fā)展的分子生物學(xué)技術(shù)為昆蟲種類的快速鑒定提供了新的方法,但皮蠹科昆蟲的分子生物學(xué)研究仍處于初步階段,且目前的分子研究多集中于斑皮蠹屬(Trogoderma),也未有針對皮蠹科內(nèi)相關(guān)屬之間系統(tǒng)的分子進(jìn)化研究。本文為首次利用DNA條形碼技術(shù)對皮蠹科倉儲(chǔ)害蟲進(jìn)行分類研究。從DNA提取方法、PCR體系擴(kuò)增進(jìn)行試驗(yàn)探索,構(gòu)建皮蠹科分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,初步建立起皮蠹科基因條形碼數(shù)據(jù)庫,以期利用DNA條形碼技術(shù)實(shí)現(xiàn)對皮蠹科害蟲的快速分類鑒定。研究內(nèi)容及結(jié)果包括:1.研究皮蠹科形態(tài)分類,分析重要種類的鑒定特征,攝取各種的背、腹、側(cè)面高清圖輔助鑒定。2.優(yōu)化DNA提取方法,探索了不同預(yù)處理方法對DNA提取效果的影響。經(jīng)過預(yù)處理后,一定程度上減少了基因組DNA的斷鏈,DNA更易擴(kuò)增長片段,且不同位點(diǎn)擴(kuò)增效果也較好,其中以9%Na Cl溶液3h預(yù)處理后的昆蟲標(biāo)本,利用磁珠法所提DNA的質(zhì)量及PCR擴(kuò)增效果最佳。3.建立適宜的PCR擴(kuò)增體系。反應(yīng)體系中加入牛血清蛋白并增加Mg2+濃度,能提高PCR擴(kuò)增效率及條帶質(zhì)量。設(shè)計(jì)的4對外圍巢式引物以A5/A6擴(kuò)增效果最優(yōu),最佳退火溫度為49℃�；谛蛄蟹治鼋⒌�5對巢式PCR組合,均能適用于較低濃度DNA擴(kuò)增。4.COⅠ基因(細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ基因)序列分析。所獲皮蠹科COⅠ基因擴(kuò)增序列為前端357bp及后端609bp片段,分別進(jìn)行拼接校正、比對,利用MEGA分析了各序列保守位點(diǎn)、變異位點(diǎn)、簡約信息位點(diǎn)、自裔位點(diǎn)、各數(shù)據(jù)組堿基組成、堿基頻率、氨基酸組成、密碼子使用情況,計(jì)算各物種間的遺傳距離及標(biāo)準(zhǔn)差,轉(zhuǎn)換與顛換比例。并對序列數(shù)據(jù)組系統(tǒng)發(fā)育信號進(jìn)行檢測,證實(shí)序列非隨機(jī)數(shù)據(jù),可為下一步構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹提供依據(jù)保證。5.系統(tǒng)發(fā)育研究。采用最大簡約法(MP)、最大似然法(ML)兩種建樹方法,對皮蠹科COⅠ前、后兩端序列組及其翻譯的氨基酸進(jìn)行分析,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。皮蠹科COⅠ基因后端序列片段所包含遺傳信息更豐富,構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹較少發(fā)生偏離,同形態(tài)分類的一致性高于前端片段,更適于作為皮蠹科系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究。6.DNA條形碼初步構(gòu)建�；诟魑锓N間遺傳距離、NJ系統(tǒng)發(fā)育樹、barcoding gap三方面對皮蠹科COⅠ基因前端序列進(jìn)行分析評價(jià),該片段完全符合DNA條形碼有效性的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),可達(dá)到種鑒定目的。利用所獲的該段基因初步構(gòu)建了皮蠹科3屬的DNA條形碼。
【圖文】：

第一章 引 言 皮蠹科 DNA 條碼分類技術(shù)研究族增加了 Ctesiini，其他同 Zhantiev[8]。Zhantiev[8]基于皮蠹科成蟲、幼蟲及蛹的 36 個(gè)形態(tài)特征，構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，如圖 1-1。Háva[9]較 Zhantiev[8]包含了更多已更新的種屬，分析其 4 亞科內(nèi) 11 個(gè)主要族群的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系如圖 1-2。 Háva[9]認(rèn)為 Trinodini 和 Trichelodini（分支 4、5）與Attagenini、Egidyellini、Anthrenini、Megatomini、Thylodriadini（分支 6~10）在分類特征上差異較顯著，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，應(yīng)當(dāng)分為兩個(gè)不同亞科。而 Zhantiev[8]將 Trinodini、Trichelodini 與 Anthrenini 聚為一支，，列入了同一亞科。

Attagenini、Egidyellini、Anthrenini、Megatomini、Thylodriadini（分支 6~10）在分類特征上差異較顯著，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，應(yīng)當(dāng)分為兩個(gè)不同亞科。而 Zhantiev[8]將 Trinodini、Trichelodini 與 Anthrenini 聚為一支，列入了同一亞科。圖 1-1 皮蠹科 11 族形態(tài)學(xué)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分支圖（Zhantiev，2000）[8]注：分支末端各族名均略寫。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S433.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2519697