【摘要】：【目的】茄科雷爾氏菌是一種常見的農(nóng)作物致病菌,引起植物青枯病。研究其脂肪酸代謝途徑將有助于尋找新的抗菌藥物靶點,為防治青枯病害提供新的思路�！痉椒ā坷么竽c桿菌FadD序列,進行同源比對發(fā)現(xiàn)茄科雷爾氏菌GMI1000中RSc2857(RsFadD)具有較高的相似性,推測其具有脂酰-CoA合成酶活性。采用PCR擴增方法獲得RsfadD基因,連入表達載體pBAD24M后互補大腸桿菌fadD突變株,并檢測轉(zhuǎn)化子的生長情況。RsfadD與pET-28b連接后,在大腸桿菌BL(DE3)中表達,并利用Ni-NTA純化獲得帶有組氨酸標簽的RsFadD,體外測定RsFadD的活性。利用同源重組方法,獲得RsfadD敲除突變株,分析突變株的生長性狀�！窘Y(jié)果】RsfadD異體互補大腸桿菌fadD突變株,恢復突變株在以脂肪酸為碳源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上生長。體外活性測定RsFadD具有脂酰-CoA合成酶活性,對不同鏈長的脂肪酸都具有活性,但活性低于大腸桿菌FadD。RsfadD突變株在添加不同鏈長脂肪酸的基礎(chǔ)培養(yǎng)上僅能微弱生長,而在豐富培養(yǎng)基上生長無差異�！窘Y(jié)論】茄科雷爾氏菌中RsfadD編碼脂酰-CoA合成酶,在脂肪酸利用過程中發(fā)揮重要作用。但RsfadD突變株在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上微弱生長,說明茄科雷爾氏菌基因組中還有其他的脂酰-CoA合成酶基因。以上研究結(jié)果為進一步研究茄科雷爾氏菌中脂酰-CoA合成酶以及脂肪酸利用機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: Solanaceae is a common pathogen of crop, which causes plant bacterial wilt. The study of fatty acid metabolism pathway will help to find new antibacterial drug targets and provide a new way of thinking for the prevention and treatment of youth and blight diseases. [methods] using E. coli FadD sequence, It was found that RSc2857 (RsFadD) in GMI1000 of Solanaria solanacearum had high similarity, and it was speculated that it had the activity of acyl-CoA synthase. The RsfadD gene was obtained by PCR amplification and supplemented with E. coli fadD mutant after being inserted into the expression vector pBAD24M, and the growth of the transformant was detected. RsfadD was expressed in E. coli BL (DE3) after it was ligated with pET-28b. RsFadD, with histidine label was purified by Ni-NTA to determine the activity of RsFadD in vitro. The RsfadD knockout mutant was obtained by homologous recombination method, and the growth traits of the mutant were analyzed. [results] RsfadD allogenic complementary Escherichia coli fadD mutant grew on the basic medium with fatty acid as carbon source. In vitro, RsFadD had the activity of acyl-CoA synthase, which was active against fatty acids with different chain lengths, but the activity was lower than that of E. coli FadD.RsfadD mutants on the basis of adding fatty acids with different chain lengths. However, there was no difference in growth on rich medium. [conclusion] RsfadD encodes acyl-CoA synthase in Solanaria solanacearum and plays an important role in fatty acid utilization. However, the RsfadD mutant grew weakly on the basic medium, which indicated that there were other acyl-CoA synthase genes in the genome of Corell solanum. The above results laid a foundation for further study of acyl-CoA synthase and fatty acid utilization mechanism in Corell solanum.
【作者單位】： 廣東食品藥品職業(yè)學院;華南農(nóng)業(yè)大學生命科學學院廣東省農(nóng)業(yè)生物蛋白質(zhì)功能與調(diào)控重點實驗室;河南省三門峽市盧氏縣第一高級中學;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31601601,31671987) 廣東食品藥品職業(yè)學院院級課題資助項目(No.2015YZ006)~~
【分類號】：S432.4

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