【摘要】：【目的】構(gòu)建西瓜食酸菌TA基因的酵母雙雜交誘餌載體,為探究TA基因編碼產(chǎn)物參與西瓜食酸菌致病的機(jī)制奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā客ㄟ^PCR擴(kuò)增TA基因,并定向克隆到載體p GBKT7,獲得可用于酵母雙雜交的誘餌載體p GBKT7-TA,經(jīng)酶切鑒定和測序驗證為正確后將p GBKT7-TA轉(zhuǎn)化到酵母菌株AH109中;進(jìn)一步用ADE2、HIS3、Lac Z報告基因活性檢測法檢測p GBKT7-TA的自激活作用,用固體及液體營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢測p GBKT7-TA的毒性作用�！窘Y(jié)果】誘餌載體p GBKT7-TA對酵母菌株AH109沒有自激活及毒性作用�！窘Y(jié)論】所構(gòu)建的誘餌載體可用于酵母雙雜交系統(tǒng)的后續(xù)工作,為進(jìn)一步從被西瓜食酸菌侵染的黃瓜子葉c DNA文庫中篩選與TA互作的蛋白奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to construct yeast two-hybrid bait vector of watermelon acidobacteria TA gene, and to lay a foundation for exploring the mechanism of TA gene encoding product involved in pathogenesis of watermelon acidobacteria. [methods] TA gene was amplified by PCR and cloned into vector p-GBKT7,. The bait vector p-GBKT7-TA, which can be used in yeast two-hybrid, was identified by restriction enzyme digestion and confirmed by sequencing. Then p-GBKT7-TA was transformed into yeast strain AH109. Furthermore, ADE2,HIS3,Lac Z reporter gene activity assay was used to detect the self-activation of p-GBKT7-TA. The toxicity of p-GBKT7-TA was detected by solid and liquid nutrient deficient medium culture. [results] the bait vector p-GBKT7-TA had no self-activation and toxicity to yeast strain AH109. [conclusion] the bait vector constructed by this method has no self-activation and toxicity to yeast strain AH109. It can be used in the follow-up work of yeast two hybrid system, It lays a foundation for screening the proteins interacting with TA from c DNA library of cucumber cotyledons infected by watermelon acid bacteria.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院;新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目“細(xì)菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)一個新型致病基因的作用機(jī)制研究”(31260419)~~
【分類號】：S432.4

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本文編號：2469975