【摘要】：桿狀病毒是節(jié)肢動物,特別是鱗翅目昆蟲的重要病原微生物,在生物防治中有著廣泛的應(yīng)用前景。其對昆蟲蟲體口服感染的過程中,需要一類稱為桿狀病毒口服感染因子的幫助才能在蟲體中腸成功建立系統(tǒng)感染。Ac110是本實驗室最新發(fā)現(xiàn)的口服感染因子之一,但其作用機制仍是未知。在本研究中,通過定點突變技術(shù)成功構(gòu)建了兩株Ac110保守氨基酸位點突變型重組桿狀病毒,將病毒DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細胞Sf9后,通過蛋白免疫印跡實驗驗證了Ac110的突變體蛋白均能夠正常表達;接著通過病毒滴度測定實驗證明了重組病毒均能在Sf9細胞中產(chǎn)生與補回型病毒相當?shù)母腥拘圆《玖Ｗ?說明Ac110的這兩個保守氨基酸位點的突變并不影響病毒在細胞中的復制和在細胞之間的傳播;最后將純化的病毒多角體口服感染甜菜夜蛾幼蟲進行生物測定實驗,發(fā)現(xiàn)Ac110的N27氨基酸位點的突變對昆蟲幼蟲的口服感染能力顯著性降低,而L35氨基酸位點的突變則沒有影響。
[Abstract]:Baculovirus is an important pathogenic microorganism of arthropods, especially Lepidoptera insects, and has a wide application prospect in biological control. In the process of oral infection of insect parasites, it needs the help of a class of oral infection factors called baculovirus in order to successfully establish a systemic infection in the midgut of insect. Ac110 is one of the newly discovered oral infection factors in our laboratory. But its mechanism is still unknown. In this study, two recombinant baculoviruses with conserved amino acid site mutation of Ac110 were successfully constructed by site-directed mutagenesis. The recombinant baculovirus DNA was transfected into insect Sf9 cells. The expression of Ac110 mutant proteins was confirmed by Western blot assay. Then the virus titer assay showed that the recombinant virus could produce the same infective virus particles as the reconstituted virus in Sf9 cells. These two conserved amino acid site mutations of Ac110 did not affect the replication of the virus in cells and the transmission between cells. Finally, the purified virus polyhedrosis was orally infected with beet Spodoptera exigua larvae. The results showed that the mutation of N27 amino acid site of Ac110 significantly decreased the oral infection ability of insect larvae, but the mutation of L35 amino acid site had no effect on insect larva oral infection ability.
【作者單位】： 中山大學生命科學學院有害生物控制與資源利用國家重點實驗室;江西科技師范大學生命科學學院;
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金(15lgjc20)
【分類號】：S476.13

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