【摘要】：為實現(xiàn)熒光定量PCR對土壤病原真菌數(shù)量更為高效、靈敏的檢測,本研究將液體培養(yǎng)的孢子懸浮液和長年耕作的水稻土制作成孢子濃度為4×10~1~4×10~6 spore/g的帶菌土,采用MoBio PowerSoil@DNA Isolation Kit提取模擬帶菌土壤總DNA,引入常規(guī)PCR預(yù)擴增包含qPCR目標序列的1 446bp片段,以預(yù)PCR產(chǎn)物為模板進行qPCR,構(gòu)建熒光定量PCR標準曲線。研究結(jié)果表明:以試劑盒提取的帶菌土壤總DNA為模板繪制的qPCR標準曲線相關(guān)系數(shù)r為0.985,檢測下限為4×10~3 spore/g土;引入預(yù)PCR后,qPCR標準曲線相關(guān)系數(shù)r為0.974,檢測下限為4×10~2 spore/g土,較未引入時提高了10倍,結(jié)合不同土壤病原真菌的特異性引物,該檢測方法可為土壤病原真菌的有效定量檢測提供技術(shù)支撐。
[Abstract]:In order to detect the number of soil pathogenic fungi more efficiently and sensitively by fluorescence quantitative PCR, spore suspension of liquid culture and paddy soil cultivated for years were used to produce spore carrying soil with a concentration of 4 脳 10 ~ (-1) and 4 脳 10 ~ (-6) spore/g. The total DNA, of simulated bacterial soil was extracted by MoBio PowerSoil@DNA Isolation Kit and the 1 446bp fragment containing the target sequence of qPCR was preamplified by conventional PCR. The fluorescence quantitative PCR standard curve was constructed by qPCR, using the pre-PCR product as template. The results showed that the correlation coefficient of qPCR standard curve drawn from the total DNA extracted by the kit was 0.985, the detection limit was 4 脳 10 ~ (-3) spore/g soil, the correlation coefficient of qPCR standard curve was 0.974 and the detection limit was 4 脳 10 ~ (2) spore/g soil after the introduction of pre-PCR, the correlation coefficient of qPCR standard curve was 0.974, and the detection limit was 4 脳 10 ~ (-2) spore/g soil. This method can provide technical support for the effective quantitative detection of soil pathogenic fungi by combining with the specific primers of different soil pathogenic fungi.
【作者單位】： 中南大學(xué)研究生院隆平分院;湖南省西瓜甜瓜研究所;湖南省植物保護研究所;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201503110-03)
【分類號】：S432.44

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