【摘要】：以前期分離得到阿特拉津降解菌株Arthrobacter sp.DNS10為供試菌株,選取海藻酸鈉作為固定化材料,采用響應(yīng)面法優(yōu)化該菌株所包含的降解酶的固定化條件。借助Plackett-Burman設(shè)計篩選確定海藻酸鈉濃度、固定化體系的p H值、加酶量和Ca Cl2溶液質(zhì)量分數(shù)4個因素作為影響固定化酶比酶活的典型因素。借助Box-Behnken設(shè)計及響應(yīng)面回歸分析擬合,確定適宜上述降解酶的最佳包埋固定化條件及方法為:在每10 m L海藻酸鈉濃度為1.93%,p H為8.5的固定化基質(zhì)中加入983μL的降解酶液(蛋白濃度為88μg·L-1),然后利用注射器將上述混合溶液滴加到質(zhì)量分數(shù)為2.7%的Ca Cl2溶液中即可制備出比酶活最高的固定化酶,實際測定固定化酶的最優(yōu)比酶活為0.190 2 U·mg-1(預(yù)測值為0.187 4U·mg-1)。上述固定化酶平均粒徑約為(0.44±0.01)cm,其在連續(xù)6次的使用過程中比酶活仍能保持在初始值的77.5%以上。上述固定化處理可有效的改善降解酶的環(huán)境貯存特性,固定化酶在常溫下保存35 d后比酶活仍能保持在其初始狀態(tài)的12.34%,而游離酶則無活性檢出。
[Abstract]:Atrazine degrading strain Arthrobacter sp. DNS10 was selected as immobilized material, and the immobilization conditions of degradation enzyme were optimized by response surface method. The concentration of sodium alginate, pH value of immobilized system, the amount of enzyme added and the mass fraction of CaCl _ 2 solution were determined by Plackett-Burman design as the typical factors affecting the specific enzyme activity of immobilized enzyme. With Box-Behnken design and response surface regression analysis, The optimum immobilization conditions and methods were determined as follows: adding 983 渭 L degradation enzyme solution (protein concentration 88 渭 g L-1) to the immobilized substrate with concentration of 1.93 渭 L sodium alginate per 10 mL alginate, then using syringe to The immobilized enzyme with the highest enzyme activity can be prepared by dropping the above mixed solution into a 2.7wt% CaCl2 solution. The optimum specific activity of immobilized enzyme was 0.190 U mg-1 (prediction value 0.187 4 U mg-1). The average particle size of the immobilized enzyme was about (0.44 鹵0.01) cm, and the specific enzyme activity remained above 77.5% of the initial value in the course of six successive uses. The immobilized enzyme could effectively improve the environmental storage characteristics of the enzyme. After 35 days of storage at room temperature, the immobilized enzyme could maintain its activity at 12.34% of its initial state, but the free enzyme could not be detected.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院;
【基金】：黑龍江省教育廳“長江學(xué)者后備”計劃項目(2012CJHB001) 黑龍江省高校科技創(chuàng)新團隊建設(shè)計劃項目(2013TD003) 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)“青年才俊”項目 黑龍江省自然科學(xué)基金面上項目(C2016020)
【分類號】：X172;X592

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本文編號：2129228