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玉米聯(lián)合固氮菌Kosakonia radicincitans GXGL-4A的分離鑒定與固氮特性研究

發(fā)布時(shí)間:2018-06-30 02:22

  本文選題:玉米 + 固氮菌 ; 參考:《微生物學(xué)通報(bào)》2016年11期


【摘要】:【目的】固氮微生物是生物固氮的主體,其菌種的選育更是生物固氮研究的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定出一株新的固氮菌,并對(duì)其固氮相關(guān)活性進(jìn)行初步研究。【方法】固氮菌采用Ashby無氮培養(yǎng)基進(jìn)行分離純化。通過形態(tài)特征分析、生理生化特征分析、16S r RNA基因序列分析和基因組掃描對(duì)固氮菌進(jìn)行鑒定。利用靛酚藍(lán)-分光光度法檢測(cè)固氮菌的泌銨能力。固氮酶活性的測(cè)定使用乙炔還原法!窘Y(jié)果】從玉米根部分離到一株固氮菌株GXGL-4A,菌體短桿狀,大小約為1.5μm×0.5μm,單個(gè)或常見2個(gè)菌體細(xì)胞串聯(lián)在一起,革蘭氏染色結(jié)果為陰性。16S r RNA基因序列分析結(jié)果表明該菌株與Kosakonia oryzae Fo8A1d 16S r RNA基因序列有95%的相似性,結(jié)合形態(tài)特征、生理生化特征和基因組掃描,將其命名為K.radicincitans GXGL-4A。對(duì)其進(jìn)行固氮基因nif H的檢測(cè),經(jīng)PCR擴(kuò)增得到預(yù)期的296 bp條帶;采用靛酚藍(lán)-分光光度法,測(cè)得發(fā)酵液中銨態(tài)氮含量為2.5 mg/L,表明該菌株具有較好的泌銨能力。乙炔還原法測(cè)其固氮酶活性,以乙烯生產(chǎn)量表示,結(jié)果顯示GXGL-4A菌株在無氮培養(yǎng)基上能夠有效地還原乙炔,達(dá)到232.94 nmol C2H4/(m L·h)!窘Y(jié)論】菌株GXGL-4A是一株可較好地分泌銨的新的固氮菌,具有很好的研究?jī)r(jià)值。
[Abstract]:[objective] nitrogen fixing microorganism is the main body of biological nitrogen fixation, and the breeding of its strain is the foundation of biological nitrogen fixation research. A new strain of nitrogen-fixing bacteria was isolated and identified in our laboratory, and its nitrogen-fixing related activities were preliminarily studied. [methods] the nitrogen-fixing bacteria were isolated and purified by Ashby nitrogen-free medium. The 16s rRNA gene sequence analysis and genome scanning were used to identify the nitrogen-fixing bacteria by morphological analysis, physiological and biochemical analysis. The ammonium excretion ability of nitrogen-fixing bacteria was determined by indigo blue-spectrophotometry. The activity of nitrogenase was determined by acetylene reduction method. [results] A nitrogen-fixing strain GXGL-4A was isolated from the roots of maize. The results of Gram staining showed that the strain had 95% similarity with Kosakonia oryzae Fo8A1d 16S rRNA gene sequence. It was named K. radicincitans GXGL-4A combined with morphological, physiological and biochemical characteristics and genome scanning. The expected 296bp band of nitrogen-fixing gene nif H was obtained by PCR, and the ammonium nitrogen content in fermentation broth was 2.5 mg / L by indigo blue spectrophotometry, which indicated that the strain had better ability to secrete ammonium. The activity of nitrogenase of GXGL-4A was measured by acetylene reduction method. The results showed that GXGL-4A strain could effectively reduce acetylene on nitrogen-free medium, and reached 232.94 nmol C2H4 / (mL h). [conclusion] GXGL-4A was a new nitrogen-fixing bacteria which could secrete ammonium well. It has good research value.
【作者單位】: 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院農(nóng)業(yè)部都市農(nóng)業(yè)(南方)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃項(xiàng)目(973計(jì)劃)(No.2015CB755702)~~
【分類號(hào)】:S513;S182

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