本文選題：甘草 + 干旱脅迫�。� 參考：《廣東藥學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)是豆科多年生草本植物,其根和根莖入藥,具有補(bǔ)脾益氣,清熱解毒,祛痰止咳,調(diào)和諸藥等功效,用于脾胃虛弱,倦怠乏力,心悸氣短,咳嗽痰多等。近年來,對(duì)甘草藥理作用深入的研究,表明黃酮類物質(zhì)是甘草中非常有效的活性成分。甘草黃酮具有抗氧化作用,抗腫瘤、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗艾滋病毒等理作用,引起了人們的廣泛關(guān)注和重視。甘草及其提取物目前廣泛用于食品、藥品、化妝品等行業(yè),國內(nèi)外對(duì)甘草需求持續(xù)升高,而現(xiàn)階段栽培甘草與野生甘草質(zhì)量存在較大差距,在生產(chǎn)上還沒有真正意義上的栽培品種,嚴(yán)重限制了甘草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。許多研究表明,適度干旱脅迫可促進(jìn)甘草有效成分的積累,提高甘草品質(zhì),但對(duì)該效應(yīng)的分子機(jī)制尚無研究報(bào)道。本課題組前期應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)分析了適度干旱脅迫對(duì)甘草根轉(zhuǎn)錄組的調(diào)控,發(fā)現(xiàn)了甘草根黃酮類化合物生物合成的一些基因。本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究適度干旱脅迫對(duì)甘草根有效成分積累和黃酮類化合物生物合成相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控,初步揭示適度干旱脅迫調(diào)控甘草黃酮類化合物積累的分子機(jī)制。本研究以6月齡栽培甘草為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行適度干旱脅迫(土壤相對(duì)含水量:40%~45%)。采用HPLC法測(cè)定對(duì)干旱脅迫30、50、70d的甘草根有效成分的含量,明確各成分的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。脅迫50d時(shí),甘草苷含量增加并不顯著,而脅迫70d時(shí),甘草苷含量迅速增加。甘草酸的含量則呈現(xiàn)先減少后增加的趨勢(shì)。甘草有效成分的含量均在70d的干旱脅迫處理下達(dá)到最高,表明延長干旱脅迫時(shí)間可以促進(jìn)甘草根有效成分的積累。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)從轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果中篩選了異黃酮2’-羥化酶(I2'H)、類異黃酮葡糖基轉(zhuǎn)移酶(IFG)、查爾酮異構(gòu)酶(CHI)、黃酮合酶2(FS2)等甘草黃酮類化合物生物合成途徑的一些關(guān)鍵酶的基因,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)這些基因在不同干旱脅迫時(shí)間的表達(dá)差異。結(jié)果表明,在脅迫50d時(shí),CHI基因的表達(dá)量達(dá)最高;適當(dāng)?shù)母珊得{迫時(shí)間可以促進(jìn)FS2的表達(dá),而過長的干旱脅迫時(shí)間會(huì)抑制該基因的表達(dá);適當(dāng)?shù)母珊得{迫下,IFG基因的持續(xù)高水平表達(dá);脅迫50d以及70d時(shí),I2’H的表達(dá)量增加,而脅迫30d的表達(dá)量較低。根據(jù)以上半定量RT-PCR的結(jié)果,適度的干旱脅迫的條件,導(dǎo)致黃酮類化合物生物合成途徑的關(guān)鍵酶基因表達(dá)上調(diào),從而促進(jìn)了甘草黃酮類化合物的積累。以GuI2’H cDNA序列為研究對(duì)象,成功克隆該基因,為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)應(yīng)用生物信息學(xué)軟件和網(wǎng)絡(luò)工具分析其cDNA序列及其編碼的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能及分子進(jìn)化特征。GuI2’H cDNA全長2425 bp,含有1521 bp的開放讀碼框(ORF),編碼538個(gè)氨基酸殘基的多肽。該蛋白質(zhì)為跨內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白,與其它物種的I2’H具有高度的序列同源性,與同科植物黃芩、大豆的I2'H親緣關(guān)系較近。結(jié)果表明,甘草異黃酮2’-羥化酶cDNA編碼異黃酮2’-羥化酶,屬于細(xì)胞色素P450 81E家族成員。
[Abstract]:licorice root and its extract are widely used in food , medicine , cosmetics and other industries . Based on the results of semi - quantitative RT - PCR , the results showed that the expression of the gene was the highest under drought stress .
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S567.71;S423

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本文編號(hào)：1999442