本文選題：杜仲 + 內(nèi)生真菌��； 參考：《河南大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)為杜仲科杜仲屬落葉喬木,中國特有經(jīng)濟(jì)樹種,國家二級保護(hù)植物。其次生代謝產(chǎn)物如綠原酸、桃葉珊瑚甙、京尼平甙等具有抗菌、抗腫瘤等藥理活性。植物內(nèi)生菌普遍存在于各種植物中,許多內(nèi)生菌能產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物,且許多是未發(fā)現(xiàn)過的新物質(zhì)。利用內(nèi)生菌篩選生物活性成分或先導(dǎo)化合物成為尋找天然藥物的又一條重要途徑,并且許多化合物對動植物致病菌有明顯的抑制作用,因此在醫(yī)藥領(lǐng)域和農(nóng)藥領(lǐng)域,植物內(nèi)生菌是目前研究的熱點(diǎn)。同一種植物生長在不同的環(huán)境,其內(nèi)生菌的多樣性及生物活性都有所不同。目前,杜仲內(nèi)生真菌研究主要集中于陜西、四川、上海等地,更重要的是缺乏對分離內(nèi)生真菌活性成分的研究。河南省開封市緊臨黃河,位于華中與華北地區(qū)分界點(diǎn),其獨(dú)特的地理位置及氣候條件為研究篩選植物內(nèi)生菌提供了獨(dú)一無二的天然資源。本研究采用組織分離法從生長于河南大學(xué)藥用植物園的杜仲葉和果實(shí)分離內(nèi)生真菌,通過觀察菌落性狀、大小、顏色篩選。培養(yǎng)液用高效液相色譜法(HPLC)檢測培養(yǎng)液中是否含有綠原酸、桃葉珊瑚苷等杜仲的主要活性成分。對峙培養(yǎng)評價(jià)每個(gè)菌株的抗菌活性。對于對峙法有抗菌活性的菌株,用生長速率法評價(jià)抗菌活性。對于抑菌效果好的內(nèi)生真菌,測定ITS片段,Blast比對鑒定其種類。希望能從中分離到具有良好抑菌效果的內(nèi)生真菌,為進(jìn)一步提取優(yōu)良生物活性和新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物打下基礎(chǔ)。結(jié)果如下:1.菌種分離用1/4劃線法對長出的杜仲內(nèi)生菌進(jìn)行分離純化,用形態(tài)觀察法和顯微檢測法對杜仲內(nèi)生菌菌絲和孢子進(jìn)行檢測分類,結(jié)果顯示:一共分出91株形態(tài)不同的菌株。2.杜仲內(nèi)生菌次級代謝產(chǎn)物化學(xué)成分測定7個(gè)菌株能夠產(chǎn)生桃葉珊瑚苷;2個(gè)菌株能夠產(chǎn)生綠原酸;沒有菌株能夠產(chǎn)生黃酮。3.杜仲內(nèi)生菌抑菌實(shí)驗(yàn)分別采用對峙法和菌絲生長速率法對杜仲內(nèi)生菌進(jìn)行抑菌活性的檢測,供試菌禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis),小麥根腐(Drechslera Sofokiniana),小麥赤霉病禾谷鐮孢(Fusarium graminearum),蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus);人類致病菌有:金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),白色念珠菌(Monilia albican),豬霍亂沙門氏菌(Salmonella choleraesuis),大腸桿菌(Escherichia coli)。由抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出分離出的菌株中對植物源的供試菌具有抑制作用的菌株較多,且對植物源供試菌具有較好的抑制作用;對動物源的供試菌具有抑制作用的菌株較少,且對動物源供試菌抑制作用較差。4.分子鑒定:用試劑盒提取杜仲內(nèi)生菌DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,生物公司測序后,序列在Gene Bank上進(jìn)行blast比對,對內(nèi)生菌進(jìn)行分子學(xué)鑒定,鑒定結(jié)果顯示:1、2、7、9、11、16、18、23、26、27、29、30、42、46號菌株同屬于鏈格孢屬(Alternaria);41號菌株屬于莖點(diǎn)霉屬(Phoma);4號菌株屬于黑孢屬(Niqrospora);31、49號菌同屬于枝孢屬(Cladosporium)。
[Abstract]:Eucommia ulmoides Oliv. (Eucommia ulmoides) is a deciduous tree of Eucommia ulmoides (Eucommia ulmoides), a special economic tree in China and a national two level protection plant. The secondary metabolites, such as chlorogenic acid, glucoside, geniposide, etc., have antibacterial and anti-tumor pharmacological activities. Endophytes are commonly found in various plants, and many endophytes can produce and host the host Plants are the same or similar metabolites, and many are undiscovered new substances. Using endophytes to screen bioactive ingredients or precursor compounds is another important way to find natural drugs, and many compounds have obvious inhibitory effects on animal and plant pathogens. Therefore, plant endophytes in the field of medicine and pesticides are endophytic bacteria. At present, the study of endophytic fungi in Eucommia ulmoides is mainly concentrated in Shaanxi, Sichuan, Shanghai and other places, and more important is the lack of research on the activity of isolated endophytic fungi. In Kaifeng, Henan Province, the Yellow River, China is located in China. The unique geographical location and climate conditions provide unique natural resources for the study and screening of endophytic bacteria. This study uses tissue separation method to isolate endophytic fungi from the leaves and fruits of Eucommia ulmoides from the medicinal botanical garden of Henan University. The main active components of Eucommia ulmoides, such as chlorogenic acid and coronoside, were detected by high performance liquid chromatography (HPLC). The antibacterial activity of each strain was evaluated by confrontation culture. The antibacterial activity was evaluated by the growth rate method. For the endophytic fungi with good bacteriostasis effect, ITS fragments and Blast were measured. It is hoped to separate the endophytic fungi with good bacteriostasis effect and lay the foundation for the further extraction of endophytic metabolites with excellent biological activity and novel chemical structure. The results are as follows: 1. the isolation and purification of Endophytes in Eucommia ulmoides by 1/4 line separation method by the method of morphological observation and microscopy Detection and classification of endophytic mycelium and spores of Eucommia ulmoides, the results showed that 91 strains of different strains of Eucommia.2. were identified by the chemical composition of secondary metabolites of Eucommia ulmoides (Eucommia ulmoides), 7 strains could produce anthocyanin, and 2 strains could produce chlorogenic acid; no strains could produce bacteriostasis experiment of flavonoids of Eucommia ulmoides.3. Do not use confrontation and mycelium growth rate method to detect the Bacteriostasis of Eucommia endophyte, for Rhizoctonia cerealis, wheat root rot (Drechslera Sofokiniana), wheat scab (Fusarium graminearum), and Bacillus cereus (Bacillus cereus), and Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus). Staphylococcus aureus), Candida albicans (Monilia albican), swine cholera Salmonella (Salmonella choleraesuis) and Escherichia coli (Escherichia coli). From the results of bacteriostasis experiments, we can see that the isolated strains have more inhibitory effects on plant source bacteria, and have a better inhibition effect on plant source bacteria. The strains with inhibitory effects on the source of the animal source were less, and the inhibition effect of the animal source for the test bacteria was poor.4. molecular identification: the DNA of Eucommia ulmoides ulmoides was extracted with the kit, and the PCR amplification was carried out. After the sequencing of the biological company, the sequence on the Gene Bank was carried out by blast comparison, and the endophyte was identified by the molecular identification. The identification results showed that 1,2,7,9,11,16,18 The strain 23,26,27,29,30,42,46 belongs to the genus Alternaria; the strain 41 belongs to the genus Phoma; the strain 4 belongs to the genus Niqrospora; 31,49 is belong to the genus Cladosporium (Cladosporium).
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S567.19;S182

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本文編號：1937323