本文關鍵詞： 抗生素 糞肥 土壤 蔬菜內(nèi)生菌 多重抗生素抗性細菌　出處：《河南師范大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：畜禽糞便是抗生素抗性細菌的一個重要儲存庫。糞便在農(nóng)業(yè)施肥中的應用往往造成農(nóng)田土壤中抗性細菌的污染。但是,糞便施肥過程中,對于抗性細菌能否通過糞便-土壤-蔬菜途徑發(fā)生轉移的問題,人們還沒有明確的結論。本研究選取常見蔬菜上海青和芹菜為研究對象,探討了施加畜禽糞肥對不同蔬菜根、莖、葉中抗生素抗性內(nèi)生細菌豐度及多樣性的影響。主要研究結果總結如下:1.大田蔬菜中抗生素抗性內(nèi)生細菌的調(diào)研。挑選河南省新鄉(xiāng)市蔬菜種植基地施加糞肥和未施糞肥的上海青和芹菜樣品,檢測了其中抗生素抗性內(nèi)生細菌的分布和豐度。結果顯示,除上海青的葉之外,所有蔬菜樣品中均檢測到了抗阿莫西林、抗頭孢氨芐、抗四環(huán)素的內(nèi)生細菌,豐度范圍在1.33×10cfu·g-1~3.44×104 cfu·g-1,但是,施肥蔬菜中抗性內(nèi)生細菌的豐度比未施肥蔬菜高1~2個數(shù)量級。其中,施肥上海青中抗阿莫西林、頭孢氨芐、四環(huán)素的內(nèi)生細菌數(shù)最高可達未施肥蔬菜的2.89倍、3.61倍和10.61倍;施肥芹菜中該數(shù)值最高可達未施肥蔬菜的9.16倍、19.13倍和10.65倍。這些結果說明,施用畜禽糞肥能引起蔬菜中抗生素抗性內(nèi)生細菌數(shù)量的顯著增加。進一步研究發(fā)現(xiàn),兩種蔬菜中β-內(nèi)酰胺類抗生素抗性的內(nèi)生細菌比例最高,芹菜中為65.80%,上海青中達到了78.82%。16S r RNA基因多樣性分析結果顯示,大田種植的上海青和芹菜中分離到的多重抗生素抗性內(nèi)生細菌主要集中在假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)和寡養(yǎng)單胞菌屬(Stenotrophomonas sp.)。尤其值得關注的是,上海青中分離到了具有多重抗生素抗性的人類條件致病菌——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。2.施加糞肥對土壤及上海青中抗生素抗性細菌豐度的影響。采用盆栽實驗研究了不同施肥處理組(施加雞堆糞組、施加商品有機肥組、施加多重抗生素抗性細菌組、未施肥組)中蔬菜植株、種植前后土壤中抗生素抗性細菌的豐度變化。結果發(fā)現(xiàn),與未施肥組相比,施加雞糞或商業(yè)有機肥均明顯提高上海青和種植土壤中抗生素抗性細菌的豐度。其中,施加雞糞的上海青中抗頭孢氨芐、抗四環(huán)素、抗環(huán)丙沙星的內(nèi)生細菌數(shù)分別是未施肥組的5.35倍、3.93倍和1.25倍,加糞土壤中上述藥物的抗性菌數(shù)分別是未施肥土壤的1.65倍、4.2倍和1.44倍,且加糞土壤中同時對上述三種藥物具有抗性的多重抗性細菌數(shù)量是未施肥土壤的4.35倍;施加商業(yè)有機肥的上海青中抗頭孢氨芐、抗四環(huán)素、抗環(huán)丙沙星的內(nèi)生細菌數(shù)分別是未施肥組的3.89倍、2.17倍和1.85倍,加肥土壤中上述抗性細菌數(shù)分別是未施肥組的1.1倍、1.58倍、1.6倍,同時抗三種藥物的多重抗性細菌數(shù)是未施肥土壤的2.7倍。這些結果表明,施肥處理能明顯增加蔬菜及土壤中抗生素抗性細菌的數(shù)量,且施加雞糞比商業(yè)有機肥更易促使土壤和蔬菜中抗性細菌增加。3.施加糞肥對土壤和上海青中多重抗生素抗性細菌群落結構的影響。從盆栽實驗的土壤、蔬菜、糞肥中,我們分離出獲得了同時具有抗頭孢氨芐、四環(huán)素和環(huán)丙沙星三種抗生素抗性的多重抗性細菌。16S r DNA序列分析及系統(tǒng)進化樹的結果表明,施加糞肥顯著改變上海青中多重抗生素抗性內(nèi)生細菌的多樣性。其中未施肥蔬菜中優(yōu)勢多重抗性內(nèi)生細菌主要為寡養(yǎng)單胞菌屬(Stenotrophomonas sp.),施肥蔬菜中優(yōu)勢多重抗藥細菌則為內(nèi)生短狀桿菌屬(Brachybacterium sp.),并且該菌在糞肥以及栽種前土壤中均被檢出。這些結果表明,在施肥及種植過程中,多重抗生素抗性細菌很可能發(fā)生了從糞肥—土壤—蔬菜的轉移。同時,上海青收獲后各處理組土壤中多重抗性細菌數(shù)較栽種前均有所增加且種屬差異較大,尤其加菌組栽種后土壤中并未檢測到多抗性大腸桿菌(Escherichia coli),卻檢出了更多新的多重抗性細菌。這說明抗生素抗性細菌所攜帶的抗性基因在農(nóng)田土壤中發(fā)生了水平轉移,增加了土壤中多重抗性細菌的多樣性,對土壤細菌群落結構產(chǎn)生持久性的影響。
[Abstract]:The effects of manure and manure on the abundance and diversity of antibiotic - resistant endogenous bacteria in vegetables were studied . The results showed that applying manure could significantly increase the number of antibiotic - resistant bacteria in soil and soil . The results showed that , during fertilization and planting , multiple antibiotic resistant bacteria were more likely to have been transferred from manure to soil - vegetable .

【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S63;S182

【參考文獻】

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本文編號：1519767