本文關(guān)鍵詞：兩株綠僵菌紫外線誘變株的生物學(xué)特性研究

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【摘要】：綠僵菌(Metarhizium anisopliae)是生物防治中常用的一種重要昆蟲病原真菌,與傳統(tǒng)農(nóng)藥相比,具有環(huán)保、安全、可持續(xù)的優(yōu)點(diǎn),但對(duì)害蟲的毒殺作用緩慢、防治效果不穩(wěn)定,其中環(huán)境中的紫外線是影響防治效果的主要原因之一,篩選抗紫外線、高毒力的綠僵菌菌株是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。本論文在篩選兩株高毒力綠僵菌紫外線誘變菌株的基礎(chǔ)上,測(cè)定了誘變前后菌株的菌落形態(tài)特性和代謝產(chǎn)物等方面的變化,研究了紫外線誘變菌株的生物學(xué)特性。具體研究?jī)?nèi)容包括以下幾方面:(1)綠僵菌的紫外誘變和高毒力菌株的篩選以2株野生菌株Ma01和Ma02作為親本菌株,將分生孢子在紫外線下分別照射20、40和60min后獲得一系列誘變株,結(jié)果表明誘變后的孢子在PDA平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)量隨紫外線照射時(shí)間的增加而減少,未經(jīng)誘變的親本株長(zhǎng)出的菌落數(shù)最多,誘變20 min的菌落數(shù)次之,誘變60 min的菌落數(shù)最少。選取菌落生長(zhǎng)快、形態(tài)穩(wěn)定的誘變菌株6株,以小菜蛾為對(duì)象進(jìn)行生物測(cè)定,結(jié)果顯示有5個(gè)誘變菌株對(duì)小菜蛾的毒力高于親本菌株,其中對(duì)小菜蛾毒力最強(qiáng)的誘變株為UV01b和UV02b,在第6 d對(duì)小菜蛾的累計(jì)死亡率分別是81.85%和91.48%。(2)紫外線誘變對(duì)綠僵菌培養(yǎng)特性的影響比較了誘變前后的菌株在PDA、CZA、SDA和SDAY培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)直徑和菌落形態(tài),測(cè)定了綠僵菌在PDA和CZA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量。結(jié)果表明:誘變株和其親本菌株在同一培養(yǎng)基上的的菌落生長(zhǎng)直徑一致;Ma01和UV01b在4種培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)差異顯著,Ma02和UV02b的菌落形態(tài)差異不顯著。綠僵菌在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量均大于在CZA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量,親本菌株Ma01和Ma02在2種培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量均大于其誘變株。(3)紫外線誘變對(duì)綠僵菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的影響用乙酸乙酯提取綠僵菌發(fā)酵液中的次級(jí)代謝產(chǎn)物(即粗毒素),用不同濃度的粗毒素對(duì)2齡小菜蛾幼蟲進(jìn)行生物測(cè)定,菌株Ma01和UV01b、Ma02和UV02b的粗毒素對(duì)小菜蛾在120 h的LC50值分別為13.3 mg/L和3.9 mg/L、56.5 mg/L和7.1 mg/L,誘變株的LC50值顯著低于其親本株的LC50值。說(shuō)明綠僵菌誘變株的粗毒素對(duì)小菜蛾幼蟲的毒殺作用明顯增強(qiáng)。分析乙酸乙酯提取到的菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的HPLC-MS圖譜可知,誘變株的出峰數(shù)目與其親本株有所不同,說(shuō)明紫外誘變改變了菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的種類。(4)紫外線誘變對(duì)綠僵菌初級(jí)代謝產(chǎn)物的影響用15%TCA-丙酮提取綠僵菌發(fā)酵液中的初級(jí)代謝產(chǎn)物(即蛋白),SDS-PAGE聚丙烯酰氨凝膠電泳結(jié)果顯示:Ma01和UV01b、Ma02和UV02b在不同發(fā)酵時(shí)間的蛋白產(chǎn)物差異顯著,誘變菌株UV01b在發(fā)酵3d時(shí)產(chǎn)生了一些新蛋白條帶,誘變菌株UV02b在發(fā)酵3 d時(shí)出現(xiàn)了2條新蛋白條帶,其中一條在31 kDa附近。表明紫外線誘變引起了菌株發(fā)酵液中蛋白質(zhì)產(chǎn)物的變化。(5)誘變菌株對(duì)紫外線耐受力的測(cè)定測(cè)定了紫外線照射40 min后親本菌株和誘變株在18 h、21 h、24 h、27 h時(shí)的孢子萌發(fā)率,結(jié)果表明誘變株的孢子萌發(fā)率顯著高于親本株,誘變株UV01b和UV02b的孢子萌發(fā)率與沒(méi)有經(jīng)過(guò)紫外線照射處理時(shí)的孢子萌發(fā)率差異不顯著,親本菌株Ma01和Ma02的孢子萌發(fā)率經(jīng)紫外線照射過(guò)后降低了40%-60%。說(shuō)明紫外線誘變株對(duì)紫外線的耐受力明顯增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S476.12

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本文編號(hào)：1261739