本文關(guān)鍵詞：粘蟲顆粒體病毒增效蛋白基因片段優(yōu)化及功能

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【摘要】：【目的】研究轉(zhuǎn)宿主粘蟲顆粒體病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段優(yōu)化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途徑�！痉椒ā可镄畔W(xué)分析增效蛋白結(jié)構(gòu)域,構(gòu)建增效蛋白基因截短片段原核表達(dá)載體,分析目的基因片段表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平、圍食膜蛋白降解效能和增強(qiáng)活性,進(jìn)一步明確Pu GV-Ps增效蛋白基因的功能區(qū)域�！窘Y(jié)果】Pu GV-Ps增效蛋白含有M60-like結(jié)構(gòu)域、鋅離子催化域和糖蛋白結(jié)合域,并包含13個潛在的糖基化位點。以此為依據(jù)設(shè)計P69(短截M60-like結(jié)構(gòu)域)和P77(短截糖蛋白結(jié)合域)2個截短片段,構(gòu)建了表達(dá)載體p ET15b-P69和p ET15bP77,原核表達(dá)量明顯高于全長基因P104。表達(dá)產(chǎn)物純化蛋白圍食膜降解活性表明,P69對斜紋夜蛾圍食膜大分子蛋白降解程度高于P77,但兩者均低于P104。病毒增強(qiáng)蘇云金桿菌(Bt)實驗表明,截短片段的表達(dá)產(chǎn)物提高了Bt對小菜蛾的毒力,但增強(qiáng)活性顯著低于P104�！窘Y(jié)論】研究結(jié)果表明,Pu GV-Ps增效蛋白基因N端M60-like結(jié)構(gòu)域和C端糖蛋白結(jié)合域?qū)ζ湓鲂ё饔玫陌l(fā)揮都具有一定功能,這些結(jié)構(gòu)對維持增效蛋白的構(gòu)象也發(fā)揮了一定的作用,截短片段P69有利于保持Pu GV-Ps增效蛋白的活性、提高表達(dá)水平。該研究結(jié)果對增效蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。
【作者單位】： 江蘇里下河地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所;揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院;
【正文快照】： 桿狀病毒(Baculovirus)是一類在自然界中僅感染節(jié)肢動物的病毒,絕大多數(shù)都來自于昆蟲綱,且集中在鱗翅目昆蟲[1]。桿狀病毒是當(dāng)前重要的生物控制因子,主要分為Alpha-,Beta-,Gamma-,Delta-baculovirus 4種[2]。轉(zhuǎn)宿主粘蟲顆粒體病毒(Pu GV-Ps)屬于Beta-baculovirus,由美洲粘蟲顆

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2 王曉燕;施定基;賈曉會;田琪琳;黃希文;徐仰倉;何培民;;聚球藻7942磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因片段的克隆[A];中國藻類學(xué)會第八次會員代表大會暨第十六次學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2011年

3 修志龍;昌增益;曾安平;;細(xì)菌色氨酸操縱子基因開關(guān)的數(shù)學(xué)模擬——阻遏和弱化雙重作用的影響[A];中國生物工程學(xué)會第三次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

4 侯李君;施定基;蔡澤富;宋東輝;王學(xué)魁;;藍(lán)藻PEPC基因的克隆與正、反義載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化[A];中國海洋湖沼學(xué)會藻類學(xué)分會第七屆會員大會暨第十四次學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2007年

5 楊東麗;張宗玉;童坦君;;衰老相關(guān)新基因的探索和分離[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

6 胡鳶雷;吳韓英;趙鋒;陳柏君;申業(yè);林忠平;;厚葉旋蒴苣苔(Boea crassifolia)耐旱、耐寒相關(guān)基因的研究與應(yīng)用[A];2006年中國植物逆境生理生態(tài)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 張歡;唐常杰;余弦;喬少杰;汪銳;左R，

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