本文關(guān)鍵詞：小菜蛾解毒代謝相關(guān)miRNA鑒定及表達(dá)分析

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【摘要】：小菜蛾P(guān)lutella xylostella (L.)是世界性遷飛害蟲,主要危害十字花科蔬菜,寄主已多達(dá)40多種,且適應(yīng)性很強,已經(jīng)對幾乎所有生產(chǎn)上使用的化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥Bt產(chǎn)生了顯著抗性。MicroRNA (miRNA)是一類內(nèi)源性的長度約為19-23 nt的單鏈非編碼小分子RNA,通過堿基互補配對原則與相應(yīng)的靶基因的mRNA (messenger RNA, mRNA)結(jié)合,進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)。研究表明,昆蟲體內(nèi)的解毒代謝蛋白家族主要包括細(xì)胞色素單加氧酶(cytochrome P450 monooxygenases, P450)、羧酸酯酶(Carboxylesterases, CarEs)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferases, GSTs)以及ABC轉(zhuǎn)運蛋白(ATP-binding cassette transporters, ABC transporters)。目前對于參與解毒代謝的miRNA尚不清楚。本研究基于敏感品系和抗性品系小菜蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選、鑒定出小菜蛾體內(nèi)與解毒代謝相關(guān)的多個miRNA,初步探討了這些miRNA與小菜蛾解毒代謝的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：1.通過對不同品系中具有高差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行篩選,得到了17個顯著差異表達(dá)的miRNA。進(jìn)而對這些差異顯著的miRNA進(jìn)行家族分析,發(fā)現(xiàn)這些家族的基因保守性高,且進(jìn)化的距離與其物種的親緣關(guān)系有關(guān)。2.通過對篩選出的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,得到了1,072個靶基因。進(jìn)一步對差異miRNA的靶基因進(jìn)行篩選,靶定到參與解毒代謝的4個基因家族、6個miRNA及48個靶基因。把48個靶基因與6個miRNA進(jìn)行數(shù)字表達(dá)量及結(jié)合位點分析,篩選得到了5個miRNA及9個靶基因。3.把篩選后的niRNA及其靶基因進(jìn)行實時熒光定量PCR檢測,其中5個miRNA的表達(dá)趨勢與數(shù)字表達(dá)譜一致,9個靶基因在毒死蜱抗性品系均為上調(diào)表達(dá),而在氟蟲腈抗性品系有1個基因的表達(dá)為下調(diào),其余8個基因為上調(diào)。本研究篩選得到小菜蛾高差異表達(dá)的miRNA,并對這些miRNA進(jìn)行了分析及靶基因預(yù)測,獲得與解毒代謝相關(guān)miRNA及靶基因。熒光定量PCR分析了這些niRNA及靶基因在敏感品系和抗性品系中的表達(dá)變化。研究結(jié)果可為進(jìn)一步探究miRNA調(diào)控解毒代謝基因的機制提供理論基礎(chǔ),為昆蟲抗藥性的研究及防治提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S433.4;Q78

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本文編號：1158723