發(fā)布時(shí)間：2017-11-08 20:31

  本文關(guān)鍵詞：小菜蛾解毒代謝相關(guān)miRNA鑒定及表達(dá)分析

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【摘要】：小菜蛾P(guān)lutella xylostella (L.)是世界性遷飛害蟲,主要危害十字花科蔬菜,寄主已多達(dá)40多種,且適應(yīng)性很強(qiáng),已經(jīng)對(duì)幾乎所有生產(chǎn)上使用的化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥Bt產(chǎn)生了顯著抗性。MicroRNA (miRNA)是一類內(nèi)源性的長度約為19-23 nt的單鏈非編碼小分子RNA,通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與相應(yīng)的靶基因的mRNA (messenger RNA, mRNA)結(jié)合,進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)。研究表明,昆蟲體內(nèi)的解毒代謝蛋白家族主要包括細(xì)胞色素單加氧酶(cytochrome P450 monooxygenases, P450)、羧酸酯酶(Carboxylesterases, CarEs)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferases, GSTs)以及ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ATP-binding cassette transporters, ABC transporters)。目前對(duì)于參與解毒代謝的miRNA尚不清楚。本研究基于敏感品系和抗性品系小菜蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選、鑒定出小菜蛾體內(nèi)與解毒代謝相關(guān)的多個(gè)miRNA,初步探討了這些miRNA與小菜蛾解毒代謝的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：1.通過對(duì)不同品系中具有高差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行篩選,得到了17個(gè)顯著差異表達(dá)的miRNA。進(jìn)而對(duì)這些差異顯著的miRNA進(jìn)行家族分析,發(fā)現(xiàn)這些家族的基因保守性高,且進(jìn)化的距離與其物種的親緣關(guān)系有關(guān)。2.通過對(duì)篩選出的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),得到了1,072個(gè)靶基因。進(jìn)一步對(duì)差異miRNA的靶基因進(jìn)行篩選,靶定到參與解毒代謝的4個(gè)基因家族、6個(gè)miRNA及48個(gè)靶基因。把48個(gè)靶基因與6個(gè)miRNA進(jìn)行數(shù)字表達(dá)量及結(jié)合位點(diǎn)分析,篩選得到了5個(gè)miRNA及9個(gè)靶基因。3.把篩選后的niRNA及其靶基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè),其中5個(gè)miRNA的表達(dá)趨勢(shì)與數(shù)字表達(dá)譜一致,9個(gè)靶基因在毒死蜱抗性品系均為上調(diào)表達(dá),而在氟蟲腈抗性品系有1個(gè)基因的表達(dá)為下調(diào),其余8個(gè)基因?yàn)樯险{(diào)。本研究篩選得到小菜蛾高差異表達(dá)的miRNA,并對(duì)這些miRNA進(jìn)行了分析及靶基因預(yù)測(cè),獲得與解毒代謝相關(guān)miRNA及靶基因。熒光定量PCR分析了這些niRNA及靶基因在敏感品系和抗性品系中的表達(dá)變化。研究結(jié)果可為進(jìn)一步探究miRNA調(diào)控解毒代謝基因的機(jī)制提供理論基礎(chǔ),為昆蟲抗藥性的研究及防治提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S433.4;Q78

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本文編號(hào)：1158723