本文關(guān)鍵詞：枯草芽胞桿菌9407TnYLB-1轉(zhuǎn)座子突變體庫(kù)的構(gòu)建

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【摘要】：枯草芽胞桿菌9407(B9407)是1株對(duì)蘋果輪紋病具有顯著防效的生防菌株。為深入研究該菌株防病的分子機(jī)制,利用攜帶轉(zhuǎn)座子TnYLB-1的溫敏型質(zhì)粒pMarA構(gòu)建了B9407的突變體庫(kù)。通過(guò)電擊轉(zhuǎn)化將pMarA轉(zhuǎn)化至B9407,經(jīng)過(guò)30℃培養(yǎng),37℃轉(zhuǎn)座誘變,50℃進(jìn)行pMarA質(zhì)粒消除,最后通過(guò)抗性篩選,獲得3 500個(gè)轉(zhuǎn)座子插入突變的單克隆,構(gòu)建了B9407的突變體庫(kù)。該轉(zhuǎn)座子TnYLB-1的轉(zhuǎn)座效率達(dá)到2.4×10-3,pMarA的質(zhì)粒消除率達(dá)97.3%。隨機(jī)挑選12株突變子進(jìn)行PCR及Southern blotting雜交,結(jié)果表明:轉(zhuǎn)座子TnYLB-1能夠隨機(jī)插入到B9407基因組上,大于90%的突變子為轉(zhuǎn)座子單拷貝插入。B9407TnYLB-1轉(zhuǎn)座子突變體庫(kù)的構(gòu)建為篩選和研究影響該菌株生防功能相關(guān)的基因并揭示其生防機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院;
【基金】：高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(20110008120013)
【分類號(hào)】：S476.1;Q78
【正文快照】： 轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位[1],利用轉(zhuǎn)座子隨機(jī)誘變技術(shù)發(fā)現(xiàn)新基因和研究基因功能已經(jīng)成為功能基因組學(xué)研究中的常用方法[2],尤其是Tn5、Tn10等可以隨機(jī)轉(zhuǎn)座的轉(zhuǎn)座子已經(jīng)在功能基因組研究中發(fā)揮了重要作用[3-4]。自20世紀(jì)80年代后,Tn917和Tn10類轉(zhuǎn)

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1150145