發(fā)布時間：2017-10-24 17:12

  本文關鍵詞：抗藥性灰飛虱穩(wěn)定內參基因的篩選

  更多相關文章： 灰飛虱 實時熒光定量PCR 內參基因 抗藥性

【摘要】：[目的]本文旨在篩選抗藥性灰飛虱穩(wěn)定的內參基因,使目標基因的定量更加準確。[方法]在利用抗性灰飛虱雌成蟲轉錄組數(shù)據(jù)挖掘新候選內參基因[26S蛋白酶體非ATP酶的調節(jié)亞基3(PMSD3)、泛素結合酶E2D2類基因(UBE2D2)、蛋白磷酸酶1B類基因(PP1B-like)和真核翻譯起始因子3亞基(e IF-3)]的基礎上,結合傳統(tǒng)持家基因[3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)、延伸因子(EF-1)、肌動蛋白1(β-ACT1)、核糖基化因子(ARF)、60S核糖體蛋白L9基因(RPL9)、40S核糖體蛋白S15e(RPS15e)和精氨酸激酶(AK)],采用以ΔC_T值法、Best Keeper、Norm Finder、ge Norm軟件法和在線工具Ref Finder分析上述候選內參基因在不同抗性灰飛虱雌成蟲和若蟲中表達量的穩(wěn)定性。[結果]在3種不同抗性的灰飛虱雌成蟲中EF-1和e IF-3基因表達最為穩(wěn)定;在抗吡蟲啉的灰飛虱若蟲中EF-1和ARF基因表達穩(wěn)定;在抗溴氰菊酯的灰飛虱若蟲中EF-1和β-ACT1基因表達穩(wěn)定;在抗毒死蜱的灰飛虱若蟲中RPL9和EF-1基因表達穩(wěn)定。[結論]研究明確了3種不同抗藥性灰飛虱雌成蟲和若蟲中穩(wěn)定表達的內參基因,為實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術提供了有力的技術支撐,對后續(xù)灰飛虱抗藥性研究中關鍵目標基因的準確定量具有重要的意義。
【作者單位】： 南京農業(yè)大學植物保護學院;
【關鍵詞】： 灰飛虱 實時熒光定量PCR 內參基因 抗藥性
【基金】：國家科技支撐計劃項目(2012BAD19B00) 南京農業(yè)大學實驗教學示范中心項目(2015syzx014)
【分類號】：S433
【正文快照】： 灰飛虱(Laodelphax striatellus)屬半翅目飛虱科,主要危害水稻、玉米和小麥,其次還是傳播多種植物病毒的重要媒介。近年來,由于灰飛虱抗藥性問題日益突出,灰飛虱抗藥性的研究也日益深入。其中,qRT-PCR技術是一項被高頻使用的分子生物學試驗技術。qRT-PCR技術依靠穩(wěn)定表達的內

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本文編號：1089716