發(fā)布時(shí)間：2017-10-22 12:05

  本文關(guān)鍵詞：孟氏隱唇瓢蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白CmonOBP1和CmonOBP2基因的克隆和時(shí)空表達(dá)

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【摘要】：孟氏隱唇瓢蟲(chóng)Cryptolaemus montrouzieri(Mulsant,1983)原產(chǎn)于澳大利亞,作為一種有效捕食性天敵瓢蟲(chóng)而被廣泛引種到世界各地,在生物防治中具有廣闊的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。昆蟲(chóng)識(shí)別揮發(fā)性氣味分子的靈敏性和特異性對(duì)其生存和繁衍起著重要作用,對(duì)孟氏隱唇瓢蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白OBPs的研究為探索昆蟲(chóng)中OBPs基因的存在方式及粉蚧防治提供了新思路。目前,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,關(guān)于孟氏隱唇瓢蟲(chóng)m RNA、轉(zhuǎn)錄組、基因表達(dá)等分子水平的研究越來(lái)越多,但對(duì)孟氏隱唇瓢蟲(chóng)嗅覺(jué)相關(guān)蛋白的研究還未見(jiàn)報(bào)導(dǎo),孟氏隱唇瓢蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序成功為本文氣味結(jié)合蛋白的研究奠定了基礎(chǔ)。1.孟氏隱唇瓢蟲(chóng)Cmon OBP1和Cmon OBP2基因的克隆和序列分析本研究采用RT-PCR和RACE技術(shù),從孟氏隱唇瓢蟲(chóng)中成功克隆出氣味結(jié)合蛋白Cmon OBP1基因(Gen Bank登陸號(hào):KU170686)和Cmon OBP2基因(Gen Bank登陸號(hào):KU170685)的全序列。Cmon OBP1基因全長(zhǎng)922 bp,包括5’端長(zhǎng)為40 bp的UTR,及3’端長(zhǎng)為462 bp的UTR,開(kāi)放閱讀框ORF長(zhǎng)為420 bp,編碼139個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的分子量為15.516 k Da,等電點(diǎn)p I為6.57,存在AATAAA加尾信號(hào)。N-末端疏水區(qū)包含由20個(gè)氨基酸構(gòu)成的信號(hào)肽,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),有4個(gè)保守的半胱氨酸,屬于Minus-C OBP。氨基酸序列中有且僅有一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)為62NLSA,及2個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)。與其它昆蟲(chóng)的Minus-C OBPs進(jìn)行同源性比對(duì)并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),發(fā)現(xiàn)與云斑天牛的親緣關(guān)系最近。Cmon OBP2基因全長(zhǎng)為620 bp,包括5’端長(zhǎng)為60 bp的UTR,及3’端長(zhǎng)為116 bp的UTR,開(kāi)放閱讀框ORF長(zhǎng)為444 bp,編碼147個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的分子量為16.444k Da,等電點(diǎn)p I為4.78,存在AATAAA加尾信號(hào)。N-末端疏水區(qū)包含由16個(gè)氨基酸構(gòu)成的信號(hào)肽,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),有6個(gè)保守的半胱氨酸,屬于Classic OBP。氨基酸序列中有3個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)。與其它昆蟲(chóng)的Classic OBPs進(jìn)行同源性比對(duì)并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),發(fā)現(xiàn)與鞘翅目昆蟲(chóng)的同源性更高。2.孟氏隱唇瓢蟲(chóng)Cmon OBP1和Cmon OBP2基因的時(shí)空表達(dá)利用q RT-PCR和RT-PCR技術(shù)對(duì)Cmon OBP1基因和Cmon OBP2基因在孟氏隱唇瓢蟲(chóng)不同發(fā)育階段,成蟲(chóng)不同組織,不同食性及幼蟲(chóng)不同營(yíng)養(yǎng)條件下的表達(dá)水平進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果表明,Cmon OBP1基因在雄性成蟲(chóng)的頭部及翅部高表達(dá),當(dāng)幼蟲(chóng)期營(yíng)養(yǎng)條件改變時(shí),表達(dá)豐度不會(huì)發(fā)生顯著改變,當(dāng)獵物由柑桔粉蚧換成碗豆修尾蚜?xí)r,表達(dá)量會(huì)明顯下降。Cmon OBP2基因在不同發(fā)育階段、不同食性及幼蟲(chóng)不同營(yíng)養(yǎng)條件下的表達(dá)量沒(méi)有顯著差異,但在成蟲(chóng)不同組織中的表達(dá)量明顯不同,且主要在成蟲(chóng)頭部及翅部表達(dá)。該結(jié)果表明,Cmon OBP1基因除了識(shí)別普通氣味分子,還可能在雄蟲(chóng)相關(guān)的信息素感受過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,Cmon OBP2基因則識(shí)別普通氣味分子,從而進(jìn)一步影響其嗅覺(jué)行為。
【關(guān)鍵詞】：孟氏隱唇瓢蟲(chóng) 氣味結(jié)合蛋白 基因克隆 序列分析 時(shí)空表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：中山大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S476.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第一章 前言9-24
• 1.1 孟氏隱唇瓢蟲(chóng)的研究概況9-13
• 1.2 昆蟲(chóng)的觸角感受器13-14
• 1.3 昆蟲(chóng)的氣味結(jié)合蛋白14-18
• 1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR概況18-21
• 1.5 選題的目的和意義21-23
• 1.6 實(shí)驗(yàn)思路和技術(shù)路線23-24
• 第二章 孟氏隱唇瓢蟲(chóng)CmonOBP1和CmonOBP2基因的克隆和序列分析24-66
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 2.2 步驟及方法26-37
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-64
• 2.4 討論與分析64-66
• 第三章 孟氏隱唇瓢蟲(chóng)CmonOBP1和CmonOBP2基因的時(shí)空表達(dá)66-86
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料66-67
• 3.2 方法與步驟67-71
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-83
• 3.4 討論與分析83-86
• 結(jié)論與展望86-88
• 參考文獻(xiàn)88-100
• 附錄100-101
• 縮略語(yǔ)表（Abbreviation）101-102
• 致謝102-103

【相似文獻(xiàn)】

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1 黃邦侃;孟氏隱唇瓢蟲(chóng)引進(jìn)福建后的繁殖和利用[J];昆蟲(chóng)知識(shí);1963年03期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 潘暢;孟氏隱唇瓢蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白CmonOBP1和CmonOBP2基因的克隆和時(shí)空表達(dá)[D];中山大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1078260