轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究倍受國內(nèi)外的高度關(guān)注,但篩選標記基因的安全性一直是人們討論的話題,去除篩選標記基因是解決轉(zhuǎn)基因安全隱患的重要措施。反-β-法尼烯（EβF）是一種倍半萜烯類化合物,是蚜蟲受到攻擊時產(chǎn)生的一種報警素。從薄荷中分離的EβF合成酶基因能夠在植物中產(chǎn)生EβF,該物質(zhì)能夠驅(qū)使蚜蟲逃離,從而減輕或避免植物受到蚜蟲的危害,具有環(huán)境友好、無污染、綠色環(huán)保、保護天敵的作用。本文通過載體構(gòu)建、基因轉(zhuǎn)化和標記基因刪除等主要環(huán)節(jié),將目的基因-----EβF合成酶基因成功轉(zhuǎn)入擬南芥中,并對選擇標記基因的刪除進行了研究。試驗得出如下結(jié)論:（1）利用含目的基因EβF的基礎(chǔ)載體p ART7-EβF產(chǎn)生出過渡載體p NMCS-EβF,再由過渡載體p NMCS-EβF與含Cre/loxp自刪除結(jié)構(gòu)的空載體PNCX構(gòu)建了含目的基因和篩選標記基因新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因（nptⅡ）的自刪除載體PNCX-EβF;（2）通過農(nóng)桿菌介導將自刪除載體PNCX-EβF轉(zhuǎn)化擬南芥,用抗生素G418作為選擇劑。G418篩選轉(zhuǎn)化擬南芥的適宜濃度為:培養(yǎng)基培育幼苗的最佳濃度為20 mg/L,噴灑土培幼苗的最佳濃度為50 mg/L;（3... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PNCX-EβF菌液PCR檢測Fig.3-1DetectionofPNCX-EβFbacterialsolutionbyPCR

pNMCS-E F6400bpAscIPacIAmpE F圖 3-2 過渡質(zhì)粒 pNMCS-EβF 菌液 PCR 檢測Fig.3-2 Detection of transition plasmid pNMCS-EβF bacterial solution by PCR注：圖中 1-7 為挑取的克隆菌液，其中 1-4 和 6-7 為陽性菌液，5 為陰性菌液； +為 pNCX-EβF 質(zhì)粒作陽性對照；-為水作陰性對照;M 是 DL2000。Note: 1-7 for the picked clones bacteria liquid， 1-4 and 6-7 for positive bacteria liquid， 5 for the negative bacterialiquid; + asthe positive CK of PNCX-EβF plasmid; - as the negative CK of water; M as the mark of DL2000載體 PNCX-EβF 構(gòu)建過程見圖 3-3。pART7-E F6696bpNotINotAmpE FCAMV 35S

水培容器Fig.3-4Watercontainer

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cre/Loxp系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因擬南芥雜交后代中的刪除效率分析[J]. 李嘉蕙,葛佳,汪麗君,文夢玲,陸萬香,羅克明.  西南師范大學學報(自然科學版). 2015(07)
[2]Cre-LoxP重組系統(tǒng)刪除內(nèi)源性選擇標記基因的效能評價[J]. 王志蕊,劉西梅,周荊榮,鄭新民,魏慶信,董發(fā)明,畢延震.  中國生物化學與分子生物學報. 2014(02)
[3]提高轉(zhuǎn)基因植物標記基因安全性策略的研究進展[J]. 李文鳳,季靜,王罡,王海勇,牛寶龍.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2010(09)
[4]小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究及其應用[J]. 喻修道,徐兆師,陳明,李連城,馬有志.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2010(08)
[5]一種利用Cre/loxP系統(tǒng)進行標記基因刪除與靶基因置換的細胞模型研究（英文）[J]. 崔文濤,任立明,侯健,張穎,陳永福,安曉榮.  生物化學與生物物理進展. 2008(06)
[6]轉(zhuǎn)基因植物高效刪除標記基因的實用型雙元轉(zhuǎn)化載體[J]. 李霞,翁海波,韓紹印,席宇,雍克蘭.  生物工程學報. 2006(04)
[7]基因工程防治蚜蟲研究進展[J]. 鄭光宇.  喀什師范學院學報. 2006(03)
[8]NPTⅡ基因和GUS基因在小麥遺傳轉(zhuǎn)化中的應用[J]. 張文蔚,成卓敏.  植物保護. 2004(01)

博士論文
[1]EβF合成酶基因的克隆及功能分析[D]. 喻修道.中國農(nóng)業(yè)科學院 2010
[2]一種用于轉(zhuǎn)基因植物安全性控制的高效基因刪除系統(tǒng)“Gene-Deletor”的構(gòu)建[D]. 羅克明.西南農(nóng)業(yè)大學 2004

碩士論文
[1]轉(zhuǎn)基因抗蚜小麥抗麥長管蚜效果的評價技術(shù)研究[D]. 鄧青.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
[2]轉(zhuǎn)Eβf合成酶基因水稻對水稻害蟲趨避性的研究[D]. 張曦廷.華中農(nóng)業(yè)大學 2011



本文編號：3536950