【摘要】：納豆激酶由納豆芽孢桿菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因編碼,在體內(nèi)外具有很強的溶解纖維蛋白活性。利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)擴增B.subtilis natto的aprN基因,并依據(jù)B.subtilis的密碼子偏好性優(yōu)化了起始30個氨基酸的密碼子,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pHT01-aprN。經(jīng)限制性酶酶切、PCR擴增和測序驗證了其編碼的正確性。通過電擊法將含有強啟動子的pHT01-aprN導(dǎo)入B.subtilis,利用氯霉素抗性篩選獲得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)最高酶活力為(289.00±3.42)U/mL,是野生菌的3.9倍,酶活力表達(dá)穩(wěn)定性良好。
[Abstract]:Nattokinase is encoded by the aprN gene of Bacillus natto (Bacillus subtilis natto) and has strong fibrinolytic activity in vivo and in vitro. The aprN gene of B.subtilis natto was amplified by polymerase chain reaction (polymerase chain reaction,PCR) technique, and the codon of 30 amino acids was optimized according to the codon preference of B.subtilis. The recombinant expression plasmid pHT01-aprN. was constructed. Restriction enzyme digestion, PCR amplification and sequencing proved the correctness of the encoding. PHT01-aprN containing strong promoter was introduced into B. subtilis by electroporation, and B.s 168/pHT01-aprN engineering strain was obtained by chloramphenicol resistance screening. After IPTG induction, the highest enzyme activity was (289.00 鹵3.42) U / mL, which was 3.9-fold higher than that of wild bacteria, and the stability of enzyme activity was good.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院陸伯勛食品安全研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(31171737)
【分類號】：Q55;Q78

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本文編號：2396753