本文關(guān)鍵詞：基于計(jì)算機(jī)視覺和光譜分析技術(shù)的蔬菜葉部病害診斷研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2012年

三聚氰胺致NRK細(xì)胞氧化損傷及其凋亡通路的研究

魏強(qiáng)  

【摘要】：目的：研究三聚氰胺對NRK細(xì)胞的毒性作用及其作用機(jī)制,從而為三聚氰胺的腎毒性作用機(jī)理作一補(bǔ)充。 方法：用37℃預(yù)熱的DMEM培養(yǎng)基溶解三聚氰胺,經(jīng)過稀釋得到3mg/ml,2.5mg/ml,2mg/ml,1.5mg/ml,1.0mg/ml,0.5mg/ml,0mg/ml共7個(gè)濃度組,用MTT法檢測不同濃度梯度的三聚氰胺對NRK細(xì)胞增殖的影響。根據(jù)不同濃度的三聚氰胺對NRK細(xì)胞增殖率的影響,選擇0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml共4個(gè)三聚氰胺濃度組用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。然后用Hoechst33342染液檢測凋亡的NRK細(xì)胞的形態(tài)。通過檢測SOD、MDA、GSH-Px的含量了解三聚氰胺對NRK細(xì)胞的氧化損傷程度。流式細(xì)胞儀定量檢測不同濃度三聚氰胺染毒的NRK細(xì)胞的凋亡率和Ac-LEHD-FMK對細(xì)胞凋亡的作用。用羅丹明123檢測線粒體膜電位。用Western Blot檢測caspase3和caspase9蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：與Omg/ml的三聚氰胺空白組相比,0.5mg/ml,1.0mg/ml,1.5mg/ml,2.0mg/ml,2.5mg/ml,3mg/ml的三聚氰胺濃度組的NRK細(xì)胞的存活力下降,并且隨著三聚氰胺濃度的升高,細(xì)胞的抑制率逐漸上升。應(yīng)用Hoechst33342染液檢測NRK細(xì)胞的形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn),凋亡的NRK細(xì)胞呈亮藍(lán)色,正常NRK細(xì)胞呈現(xiàn)低藍(lán)色。在檢測NRK細(xì)胞的氧化指標(biāo)中發(fā)現(xiàn),與空白組相比,經(jīng)過1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺處理的NRK細(xì)胞中的SOD和GSH-Px含量下降,MDA含量上升,隨著三聚氰胺濃度的升高,SOD和GSH-Px含量逐漸降低,而MDA的含量逐漸升高,呈現(xiàn)濃度依賴性效應(yīng)。經(jīng)過流式細(xì)胞術(shù)檢測三聚氰胺對NRK細(xì)胞的凋亡影響發(fā)現(xiàn),與空白組相比,1mg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺濃度組的NRK細(xì)胞的凋亡率上升；但是經(jīng)過Ac-LEHD-FMK預(yù)處理的1mg/ml的三聚氰胺濃度組與1mg/ml的三聚氰胺濃度組相比,NRK細(xì)胞的凋亡率下降,并且正常細(xì)胞的數(shù)量與Omg/ml的三聚氰胺空白組接近,這說明Ac-LEHD-FMK能抑制三聚氰胺誘導(dǎo)的NRK細(xì)胞凋亡。三聚氰胺染毒組與對照組相比,NRK細(xì)胞的線粒體膜電位降低,并且呈現(xiàn)濃度依賴性效應(yīng)。經(jīng)過lmg/ml,2mg/ml和3mg/ml的三聚氰胺處理的NRK細(xì)胞中的caspase9前體蛋白和caspase3前體蛋白的表達(dá)量下降,caspase9活化蛋白和caspase3活化蛋白的表達(dá)量上升,并且這種變化隨著三聚氰胺濃度的升高而加大,呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。 結(jié)論：三聚氰胺抑制NRK細(xì)胞的增殖,造成氧化損傷,并誘導(dǎo)NRK細(xì)胞以線粒體通路凋亡

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：S859.8
【目錄】：

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