本文關(guān)鍵詞：基于切刻內(nèi)切酶信號放大的電致化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器的研究

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【摘要】：利用切刻內(nèi)切酶的酶切作用實(shí)現(xiàn)信號放大,結(jié)合量子點(diǎn)高效的電化學(xué)發(fā)光性能,構(gòu)建了一種新型電化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器。將捕獲探針DNA(c-DNA)通過自組裝的方式固定到金電極表面,后與目標(biāo)DNA(t-DNA)互補(bǔ)雜交形成雙鏈DNA,利用切刻內(nèi)切酶Nt.Bst NBI特異性識別雙鏈上的酶切位點(diǎn)(5'-GAGTC-3'),然后在c-DNA相應(yīng)的切割位點(diǎn)(識別序列3'端后的4個堿基處)對其進(jìn)行剪切,釋放出目標(biāo)鏈,參與下一輪的雜交及酶切,通過目標(biāo)物的循環(huán)利用,實(shí)現(xiàn)信號放大。利用N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亞胺(EDC)活化羧基化Cd Te量子點(diǎn)表面的羧基,與電極表面殘留的c-DNA末端的氨基共價交聯(lián),通過測定捕獲的量子點(diǎn)的電化學(xué)發(fā)光信號對目標(biāo)DNA進(jìn)行檢測。優(yōu)化后的檢測條件為:c-DNA濃度1μmol/L,雜交時間60 min,Nt.Bst NBI濃度0.5 U/μL,酶切反應(yīng)時間4 h。在優(yōu)化條件下,目標(biāo)DNA濃度在2.0×10~(-13)~2.0×10~(-11)mol/L范圍內(nèi),其對數(shù)與電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系,檢出限為7.3×10~(-14) mol/L。人體血樣加標(biāo)回收率為96.4%~108.0%。
【作者單位】： 電磁化學(xué)功能物質(zhì)廣西重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室桂林理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： DNA生物傳感器 切刻內(nèi)切酶 量子點(diǎn) 電致化學(xué)發(fā)光 信號放大
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Nos.21165007,21375031)資助~~
【分類號】：O657.1;TP212
【正文快照】： 1引言近年來,隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展,低濃度特定DNA序列的超靈敏檢測在臨床診斷、基因突變檢測等生物學(xué)研究中顯示出越來越重要的作用和意義[1~4]。與熒光法[5]、石英晶體微天平法[6]、比色法[7]等眾多的DNA檢測方法相比,電化學(xué)發(fā)光法因其方法簡單、響應(yīng)速度快、靈敏度高和選

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本文編號：751628