本文關(guān)鍵詞：脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其在生產(chǎn)生物柴油中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在本論文中，主要從脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化、誘變育種、對脂肪酶進行固定化和分離純化等幾方面進行研究： (1) 進行了脂肪酶產(chǎn)生菌的大量篩選工作。經(jīng)以橄欖油為唯一碳源Rhodamine B為指示劑的平板初篩實驗，搖瓶復(fù)篩及固定化脂肪酶粗酶催化轉(zhuǎn)酯反應(yīng)生產(chǎn)生物柴油實驗，最終篩選出一株所產(chǎn)生的脂肪酶可以有效催化轉(zhuǎn)酯反應(yīng)生產(chǎn)生物柴油的真菌G5。通過對G5進行形態(tài)學(xué)觀察，初步確定其屬于地霉菌屬(Geotrichum)。對其胞外粗酶液酶基本性質(zhì)的研究表明：G5脂肪酶胞外粗酶液作用的最適溫度為40℃，最適作用pH為7.5，在50℃以內(nèi)和pH6.0～8.0之間有較好的穩(wěn)定性。 (2) 對篩選到的G5菌株液體搖瓶產(chǎn)脂肪酶的條件進行了優(yōu)化。確定其最適產(chǎn)酶條件為：蔗糖1.0g，黃豆粉2.0g，蛋白胨0.5g，(NH_4)_2SO_4 0.25g，KH_2PO_4 0.1g，MgSO_4·7H_2O 0.05g，橄欖油0.5ml，水100ml，pH 6.0；培養(yǎng)溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速170rpm，搖瓶裝液量為300ml三角瓶裝液50ml，最佳培養(yǎng)時間68～72小時。 (3) 在確定了最佳發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，對于金屬離子、油脂的添加對G5生長及產(chǎn)酶的影響進行了研究。結(jié)果表明，Mg~(2+)和Fe~(2+)能夠促進其生長及產(chǎn)酶，其中Mg~(2+)的促進作用明顯：而Na~+、Mn~(2+)、Zn~(2+)有不同程度的抑制作用，Mn~(2+)的抑制作用較為明顯。在沒有油脂存在下，該菌株產(chǎn)生的脂肪酶活較低，而在添加了天然油脂和合成油脂后，酶活大幅度提高，尤以橄欖油的誘導(dǎo)作用最為顯著。由以上結(jié)果推定G5菌株所產(chǎn)生的脂肪酶為誘導(dǎo)酶。 (4) 用紫外線及EMS對G5進行誘變育種。結(jié)果證明EMS誘變效果較好。G5經(jīng)EMS誘變后傳代3次，，酶活比出發(fā)菌株提高了178.6％。還需進一步的誘變實驗獲得穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)脂肪酶菌株。 (5) 通過對G5脂肪酶固定化酶條件的優(yōu)化，初步確定了以硅藻土為載體的固定化G5脂肪酶的方法：固定化緩沖體系pH 7.0磷酸緩沖溶液，固定化溫度37℃，靜置固定化，固定化酶量與載體的比例(g／g)1：10。 隨后分別采用有溶劑體系和無溶劑體系兩種反應(yīng)體系，考察了上述硅藻土固定化的G5脂肪酶對橄欖油、棉籽油和煎炸廢油與甲醇反應(yīng)生成油酸甲酯的反應(yīng)
【關(guān)鍵詞】：地霉 脂肪酶 硅藻土固定化 生物柴油 分離純化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：TE667
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 第一章 緒論10-31
• 1.1 脂肪酶的分子催化機理11-12
• 1.2 脂肪酶的底物特異性12-14
• 1.2.1 位置特異性13
• 1.2.2 脂肪酸特異性13-14
• 1.2.3 立體特異性14
• 1.3 脂肪酶的催化特性14
• 1.4 脂肪酶在非水相介質(zhì)中的催化14-18
• 1.4.1 非水相催化特性14-16
• 1.4.2 脂肪酶在非水相介質(zhì)中催化的應(yīng)用16-18
• 1.5 生物柴油概述18-21
• 1.5.1 生物柴油的應(yīng)用現(xiàn)狀19
• 1.5.2 目前生物柴油的生產(chǎn)方法19-21
• 1.6 應(yīng)用脂肪酶法制備生物柴油21-24
• 1.6.1 提高脂肪酸甲(乙)酯產(chǎn)率的方法22-23
• 1.6.2 降低生產(chǎn)成本23-24
• 1.7 本論文的研究目的和意義24-25
• 參考文獻25-31
• 第二章 脂肪酶高產(chǎn)菌種的選育及其粗酶性質(zhì)研究31-55
• 2.1 導(dǎo)言31-33
• 2.2 材料和方法33-36
• 2.2.1 主要試劑33
• 2.2.2 主要儀器33
• 2.2.3 土樣采集33
• 2.2.4 培養(yǎng)基33-34
• 2.2.5 方法34-36
• 2.3 結(jié)果36-47
• 2.3.1 菌種篩選36-38
• 2.3.2 產(chǎn)脂肪酶菌株G5的鑒定38-39
• 2.3.3 G5菌株的生長特性39
• 2.3.4 G5菌株產(chǎn)酶條件的優(yōu)化39-47
• 2.4 G5脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)47-50
• 2.4.1 酶作用的最適溫度47-48
• 2.4.2 酶作用的最適pH48
• 2.4.3 酶的熱穩(wěn)定性48-49
• 2.4.4 酶的pH穩(wěn)定性49-50
• 2.5 產(chǎn)脂肪酶菌株誘變育種50-52
• 2.5.1 出發(fā)菌株選定50
• 2.5.2 紫外照射時間的確定50
• 2.5.3 EMS對G5菌株誘變處理時間的確定50-51
• 2.5.4 誘變篩選51-52
• 2.6 本章小結(jié)52-53
• 參考文獻53-55
• 第三章 固定化地霉G5脂肪酶用于生物柴油生產(chǎn)的初步研究55-71
• 3.1 引言55-57
• 3.2 材料與方法57-59
• 3.2.1 材料57
• 3.2.2 方法57-59
• 3.3 結(jié)果與討論59-67
• 3.3.1 蛋白含量測定59
• 3.3.2 G5脂肪酶對甲醇耐受性的檢測59-60
• 3.3.3 酶固定化條件的優(yōu)化60-62
• 3.3.4 固定化酶催化酯化反應(yīng)生產(chǎn)生物柴油62
• 3.3.5 固定化酶催化轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)生產(chǎn)生物柴油62-66
• 3.3.6 固定化酶的操作穩(wěn)定性66-67
• 3.4 本章小結(jié)67-68
• 參考文獻68-71
• 第四章 G5脂肪酶的分離純化71-82
• 4.1 引言71-72
• 4.2 材料和方法72-74
• 4.2.1 材料72
• 4.2.2 儀器72
• 4.2.3 粗酶液制備72
• 4.2.4 硫酸銨分級沉淀72
• 4.2.5 透析及超濾濃縮72-73
• 4.2.6 DEAE-Sephadex A-50離子交換層析73
• 4.2.7 Sephadex G-100分子篩73
• 4.2.8 脂肪酶酶活力測定73
• 4.2.9 蛋白含量測定73
• 4.2.10 電泳分析73-74
• 4.3 結(jié)果74-78
• 4.3.1 G5菌株發(fā)酵粗酶液脂肪酶同工酶檢測74
• 4.3.2 硫酸銨分級沉淀：74
• 4.3.3 透析及超濾濃縮：74
• 4.3.4 DEAE-Sephadex A-50離子交換層析(梯度式洗脫)74-76
• 4.3.5 Sephadex G-100分子篩：76
• 4.3.6 SDS-PAGE檢測酶純度76-77
• 4.3.7 G5脂肪酶的分子量77-78
• 4.4 討論78-80
• 參考文獻80-82
• 后續(xù)工作展望82-83
• 致謝83-84
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表84

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 郭敏;熊濤;邱祖明;吳順清;田志宏;;古代絲織品文物霉斑清洗的生物學(xué)方法探析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年34期

2 洪鯤;張豪;乙引;張習(xí)敏;;產(chǎn)脂肪酶細菌的篩選及發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年09期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盧亞萍;位置非特異性脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及脂肪酶基因的表達[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李涵;植物內(nèi)生真菌的多樣性及其代謝產(chǎn)物活性研究[D];吉林大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其在生產(chǎn)生物柴油中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333702