球形賴氨酸芽孢桿菌合成納米銀蛋白分離純化及鑒定
發(fā)布時間：2021-04-13 07:17
金屬納米材料是納米材料的一個重要分支,它以貴金屬金、銀、銅為代表,其中納米銀的研究結(jié)果最多。隨著綠色、環(huán)保觀念的普及,利用生物系統(tǒng)合成納米銀粒子的生物法備受關(guān)注。在生物分子的保護下,納米銀的穩(wěn)定性和分散性得到了較大提高,具有良好的生物相容性、特殊的理化性質(zhì)及優(yōu)異的抗菌、抗炎作用和較低的生物毒性,在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域內(nèi)具有獨特的優(yōu)勢和舉足輕重的地位。深入研究生物制備納米銀的合成機制,對于制備更加高效、形貌可控、性質(zhì)穩(wěn)定的抗菌納米銀產(chǎn)品意義重大。本論文通過預(yù)實驗發(fā)現(xiàn),球形賴氨酸芽孢桿菌Lysinibacillus sphaericus（L.sphaericus）的發(fā)酵液經(jīng)離心除菌后的上清可誘導(dǎo)合成納米銀,因該菌發(fā)酵液上清主要成分為胞外分泌蛋白,故推測納米銀合成機理可能與L.sphaericus發(fā)酵液上清中的某類蛋白或某幾類蛋白的協(xié)同作用有關(guān)。本研究首先對L.sphaericus進行活化和發(fā)酵培養(yǎng),將其發(fā)酵菌液采用離心除菌體、鹽析、離子交換層析等方法進行分離純化,最終從L.sphaericus發(fā)酵液上清中成功分離出具有高效合成納米銀能力的純化蛋白——納米銀合成蛋白。該蛋白大小約為115 k D...
【文章來源】：淮陰工學(xué)院江蘇省
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
BSA標準曲線
淮陰工學(xué)院碩士學(xué)位論文182.3實驗結(jié)果與討論2.3.1發(fā)酵液上清的初步純化實驗菌株的發(fā)酵液和發(fā)酵液上清經(jīng)測定，pH值均在7.5左右。發(fā)酵液上清經(jīng)過各組不同飽和度（20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）下的鹽析，將各組獲得的沉淀上清，分別測定OD值并通過BSA標準曲線獲得蛋白含量。以不同飽和度（X）為橫坐標，沉淀上清中蛋白含量為縱坐標（Y）繪制鹽析曲線，如圖2.2所示。圖2.2硫酸銨鹽析曲線Fig.2.2Ammoniumsulfatesaltingoutcurve由圖2.2可知，在飽和度20～90%范圍內(nèi)，鹽析沉淀上清液中的蛋白含量隨飽和度的增加而下降，當飽和度增大到80%之后，沉淀上清中殘留的蛋白含量已經(jīng)很低了，換言之，即發(fā)酵液上清中絕大多數(shù)蛋白均已析出，通過離心聚集在鹽析沉淀中，實驗分離的目標蛋白很有可能也在其中。將鹽析獲得的各組沉淀蛋白溶解后進行過夜透析，得到各組飽和度下的透析蛋白液。利用紫外分光光度計測出各飽和度下沉淀蛋白和透析蛋白（蛋白液均稀釋10倍后測定）的OD值，根據(jù)BSA標曲得到各飽和度下沉淀蛋白和透析蛋白的含量。連同之前測得的沉淀上清蛋白含量一并記錄于下表2.6所示。
淮陰工學(xué)院碩士學(xué)位論文20圖2.3不同飽和度下透析蛋白溶液合成AgNPs顏色變化（A）；各組飽和度下透析蛋白液AgNPs合成峰圖（B）Fig.2.3ColorchangeofsyntheticAgNPsindialysisproteinsolutionobtainedunderdifferentsaturation(A);PeakgraphsofAgNPssynthesisofdialysisproteinsolutionateachgroupsaturation(B)將80%飽和度下所得透析液進行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)條帶數(shù)目確定目前透析蛋白液的純度，如圖2.4可知，該透析液所含蛋白質(zhì)種類較多，各蛋白分子量大小分布在40～115kDa，后面還需選擇合適的填料進行離子交換樹脂層析，進一步分離純化目的蛋白。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Green synthesis, antimicrobial and cytotoxic effects of silver nanoparticles mediated by Eucalyptus camaldulensis leaf extract[J]. Afrah Eltayeb Mohammed. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2015(05)
[2]納米銀催化的甲烷選擇還原NO反應(yīng)研究[J]. 石川,程謨杰,曲振平,包信和. 復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版). 2002(03)
博士論文
[1]生物合成納米材料的制備、表征及環(huán)境行為研究[D]. 火燦.華北電力大學(xué)(北京) 2019
碩士論文
[1]利用細菌介導(dǎo)制備納米銀的研究[D]. 熊文.東北林業(yè)大學(xué) 2015
本文編號：3134866
【文章來源】：淮陰工學(xué)院江蘇省
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
BSA標準曲線
淮陰工學(xué)院碩士學(xué)位論文182.3實驗結(jié)果與討論2.3.1發(fā)酵液上清的初步純化實驗菌株的發(fā)酵液和發(fā)酵液上清經(jīng)測定，pH值均在7.5左右。發(fā)酵液上清經(jīng)過各組不同飽和度（20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）下的鹽析，將各組獲得的沉淀上清，分別測定OD值并通過BSA標準曲線獲得蛋白含量。以不同飽和度（X）為橫坐標，沉淀上清中蛋白含量為縱坐標（Y）繪制鹽析曲線，如圖2.2所示。圖2.2硫酸銨鹽析曲線Fig.2.2Ammoniumsulfatesaltingoutcurve由圖2.2可知，在飽和度20～90%范圍內(nèi)，鹽析沉淀上清液中的蛋白含量隨飽和度的增加而下降，當飽和度增大到80%之后，沉淀上清中殘留的蛋白含量已經(jīng)很低了，換言之，即發(fā)酵液上清中絕大多數(shù)蛋白均已析出，通過離心聚集在鹽析沉淀中，實驗分離的目標蛋白很有可能也在其中。將鹽析獲得的各組沉淀蛋白溶解后進行過夜透析，得到各組飽和度下的透析蛋白液。利用紫外分光光度計測出各飽和度下沉淀蛋白和透析蛋白（蛋白液均稀釋10倍后測定）的OD值，根據(jù)BSA標曲得到各飽和度下沉淀蛋白和透析蛋白的含量。連同之前測得的沉淀上清蛋白含量一并記錄于下表2.6所示。
淮陰工學(xué)院碩士學(xué)位論文20圖2.3不同飽和度下透析蛋白溶液合成AgNPs顏色變化（A）；各組飽和度下透析蛋白液AgNPs合成峰圖（B）Fig.2.3ColorchangeofsyntheticAgNPsindialysisproteinsolutionobtainedunderdifferentsaturation(A);PeakgraphsofAgNPssynthesisofdialysisproteinsolutionateachgroupsaturation(B)將80%飽和度下所得透析液進行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)條帶數(shù)目確定目前透析蛋白液的純度，如圖2.4可知，該透析液所含蛋白質(zhì)種類較多，各蛋白分子量大小分布在40～115kDa，后面還需選擇合適的填料進行離子交換樹脂層析，進一步分離純化目的蛋白。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Green synthesis, antimicrobial and cytotoxic effects of silver nanoparticles mediated by Eucalyptus camaldulensis leaf extract[J]. Afrah Eltayeb Mohammed. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2015(05)
[2]納米銀催化的甲烷選擇還原NO反應(yīng)研究[J]. 石川,程謨杰,曲振平,包信和. 復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版). 2002(03)
博士論文
[1]生物合成納米材料的制備、表征及環(huán)境行為研究[D]. 火燦.華北電力大學(xué)(北京) 2019
碩士論文
[1]利用細菌介導(dǎo)制備納米銀的研究[D]. 熊文.東北林業(yè)大學(xué) 2015
本文編號：3134866
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