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油桐桐酸合成酶基因(fadx)的克

發(fā)布時間:2017-01-03 14:45

  本文關(guān)鍵詞:生物柴油原料評價及其混合性能改善研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2007年

油桐桐酸合成酶基因(fadx)的克隆、反義表達(dá)載體的構(gòu)建及對煙草的初步轉(zhuǎn)化

李元  

【摘要】: 隨著全球性化石資源日益枯竭,加快發(fā)展以生物柴油為代表的可再生能源勢在必行。以油桐的種子榨出的桐油作為原料生產(chǎn)生物柴油具有明顯的優(yōu)勢,但美中不足是其主要成分α—桐酸(18:3Δ~(9cis,11trans,13trans)含量過高,這不符合優(yōu)質(zhì)生物柴油原料多不飽和脂肪酸含量盡量低的要求。α—桐酸合成酶是控制亞油酸向α—桐酸轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶,本研究通過反義表達(dá)來抑制α—桐酸的合成,從而獲得符合生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)生物柴油標(biāo)準(zhǔn)的脂肪酸原料。方法是以生長中的油桐種子為材料,利用改良TRIzoL法提取總RNA,并根據(jù)GenBank中已經(jīng)登錄的α—桐酸合成酶基因fadx的序列,設(shè)計特異性引物,采用RT-PCR方法,得到fadx基因全長cDNA,克隆到pMD18-T-simple載體中測序并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。將所得基因經(jīng)BamHI和SacI酶切后插入表達(dá)載體質(zhì)粒pBI121,構(gòu)建反義表達(dá)載體pBI121 fadx,,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入煙草葉片。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2007
【分類號】:Q943.2
【目錄】:

  • 中文摘要3-4
  • 英文摘要4-7
  • 1 引言7-18
  • 1.1 生物柴油綜述7-14
  • 1.1.1 世界能源安全面臨挑戰(zhàn)7
  • 1.1.2 環(huán)境保護(hù)迫在眉睫7-8
  • 1.1.3 開發(fā)生物柴油的必要性8-10
  • 1.1.4 生物柴油的發(fā)展歷史10
  • 1.1.5 生物柴油發(fā)展現(xiàn)狀10-11
  • 1.1.6 生物柴油產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸11-13
  • 1.1.7 油桐概述13-14
  • 1.2 脂肪酸脫氫酶概述14-18
  • 1.2.1 脂肪酸脫氫酶的分類14-15
  • 1.2.2 脂肪酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)15-16
  • 1.2.3 主要的脂肪酸脫氫酶基因16-18
  • 1.2.4 脂肪酸脫氫酶的應(yīng)用前景18
  • 1.3 本研究的目的和意義18
  • 2 材料與方法18-30
  • 2.1 材料18-20
  • 2.1.1 植物材料18
  • 2.1.2 試劑盒18-19
  • 2.1.3 化學(xué)試劑19
  • 2.1.4 菌種19
  • 2.1.5 質(zhì)粒載體19
  • 2.1.6 酶19
  • 2.1.7 部分儀器19-20
  • 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-30
  • 2.2.1 部分溶液及培養(yǎng)基的配制20-22
  • 2.2.2 油桐種子桐酸合成酶基因的克隆與鑒定22-27
  • 2.2.3 pBI121fadx反義表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化27-30
  • 3 結(jié)果與分析30-36
  • 3.1 油桐種子中RNA的提取30
  • 3.2 fadx基因的擴(kuò)增結(jié)果30-31
  • 3.3 pMD18-T-fadx重組質(zhì)粒的鑒定31-32
  • 3.4 測序及序列分析32-35
  • 3.5 反義表達(dá)載體的構(gòu)建35-36
  • 3.6 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定36
  • 4 討論36-37
  • 5 結(jié)論37-39
  • 致謝39-40
  • 參考文獻(xiàn)40-46
  • 作者簡介46
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    6 王潤生 朱龍章;[N];中國綠色時報;2009年

    7 通訊員 譚艷 向興波;[N];恩施日報;2010年

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      本文關(guān)鍵詞:生物柴油原料評價及其混合性能改善研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



    本文編號:232998

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