裸甲藻溶藻細菌的篩選及其胞外抑藻活性物質的分離鑒定
發(fā)布時間:2023-07-01 13:48
在適宜的條件下,一些藻類能夠急劇增加或聚集,海水中藻細胞密度銳增,使水體顏色改變,并有可能造成海洋生物死亡,這就是所謂的赤潮(red tide)現(xiàn)象。除了微藻外,其他一些單細胞浮游生物也能夠形成赤潮。 海洋水體富營養(yǎng)化是導致赤潮的直接原因。國內外對赤潮的研究已持續(xù)幾十年,前人在采用物理、化學和其他生物學方法治理赤潮不甚理想的狀況下,利用微生物進行生物控藻引起了人們的極大關注 目前,溶藻微生物主要包括:溶藻細菌、溶藻放線菌、溶藻真菌、噬藻體、原生動物。是最具潛力的生物控制方法之一。 溶藻細菌(Algicidal bacteria)是指以直接或間接方式抑制或殺死藻類、溶解藻細胞的細菌統(tǒng)稱。1924年溶藻細菌首次被發(fā)現(xiàn) 微藻中的裸甲藻,是南方海域赤潮爆發(fā)多見報道的一種優(yōu)勢藻種。 裸甲藻屬甲藻門,是單細胞微藻,是水生動物的餌料,大量繁殖使水體在陽光的照射下反映出紅棕色,但過量生長則形成對水產有害的“赤潮”。而且能夠產生多種毒素,使魚蝦貝類死亡等,對人體亦有危害。國內外對裸甲藻引起的赤潮研究相對較少。 本研究依次從中國萊州灣、膠州灣以及海南三亞市紅沙港等海域采集水樣,采用液體感染法,即將劃線分離...
【文章頁數(shù)】:75 頁
【學位級別】:碩士
【文章目錄】:
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語
第一章 文獻綜述
1 赤潮
2 赤潮的成因
2.1 富營養(yǎng)化與赤潮
2.2 物理環(huán)境與赤潮
3 裸甲藻與赤潮
4 菌藻相互作用關系
5 國內外赤潮防治的研究進展
6 溶藻微生物
6.1 溶藻細菌
6.2 溶藻放線菌
6.3 溶藻真菌
6.4 藻類病毒
7 從溶藻細菌中尋找溶藻活性物質
7.1 背景
7.2 研究進展
7.3 溶藻細菌胞外溶藻活性物質的分離純化新技術
7.3.1 固相萃取技術
7.3.2 超臨界流體萃取(SFE)與超臨界流體色譜(SFC)
7.3.3 高效毛細管電泳色譜技術
8 溶藻細菌胞外溶藻活性物質的結構鑒定研究方法
8.1 紫外和可見光譜
8.2 紅外光譜
8.3 質譜
8.4 核磁共振
9. 本研究的主要內容
10. 本研究的意義
第二章 兩株溶解赤潮微藻的海洋溶解菌的分離與鑒定
摘要
1 引言
2 材料與方法
2.1 材料
2.1.1 主要實驗器材
2.1.2 藻種來源
2.1.3 培養(yǎng)基
2.1.4 藻種培養(yǎng)
2.2 方法
2.2.1 菌種的分離、篩選
2.2.2 藻細胞生長曲線的測定
2.2.3 藻菌相互作用關系曲線
2.2.4 藻細菌的16SrDNA測序
2.2.4.1 細菌基因組DNA的提取
2.2.4.2 純化回收
2.2.4.3 目的基因片段克隆
2.2.4.4 CaCl2法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞
3 菌種保藏
4. 實驗結果
4.1 裸甲藻分別與兩株菌不同濃度共培養(yǎng)的黃化現(xiàn)象
4.2 兩株細菌與藻共培養(yǎng)
4.3 兩株菌的電鏡觀察
4.4 兩株菌的16S r DNA序列
4.5 基于16SrDNA的兩株菌系統(tǒng)發(fā)育樹
4.6 兩株菌生理生化鑒定
5. 討論
6 小結
第三章 細菌HSB07活性物質的分離與研究
摘要
1 引言
2 實驗儀器與材料
2.1 主要儀器設備
2.2 實驗材料
2.2.1 供試藻種與菌種
2.2.2 培養(yǎng)基
3 試驗方法
3.1 小量發(fā)酵制備粗提物
3.1.1 小量發(fā)酵
3.1.2 制備粗提物
3.1.3 可行性分析
3.2 菌株HSB07代謝粗提物的制備
3.2.1 固體培養(yǎng)
3.2.2 液體培養(yǎng)
3.2.3 發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物制備
3.3 柱層析
3.3.1 TLC層析
3.3.2 硅膠柱
3.3.3 粗提物抑藻活性測定
3.3.4 凝膠柱層析
3.3.5 HPLC分析
3.3.6 核磁共振分析
3.3.7 質譜分析
4 實驗結果與分析
4.1 可行性分析
4.2 大量發(fā)酵的粗提物
4.3 硅膠柱分離
4.4 粗提物抑藻
4.5 凝膠柱層析
4.6 HPLC層析
4.7 活性組分#12氫譜分析
4.8 活性組分#12質譜分析
4.9 組分#4的氫譜
5 其他組分譜圖
第四章 細菌HSB07發(fā)酵條件優(yōu)化
1. 引言
2. 主要儀器設備
3. 發(fā)酵方案設計
4. 實驗結果
全文結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
致謝
本文編號:3836358
【文章頁數(shù)】:75 頁
【學位級別】:碩士
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摘要
ABSTRACT
縮略語
第一章 文獻綜述
1 赤潮
2 赤潮的成因
2.1 富營養(yǎng)化與赤潮
2.2 物理環(huán)境與赤潮
3 裸甲藻與赤潮
4 菌藻相互作用關系
5 國內外赤潮防治的研究進展
6 溶藻微生物
6.1 溶藻細菌
6.2 溶藻放線菌
6.3 溶藻真菌
6.4 藻類病毒
7 從溶藻細菌中尋找溶藻活性物質
7.1 背景
7.2 研究進展
7.3 溶藻細菌胞外溶藻活性物質的分離純化新技術
7.3.1 固相萃取技術
7.3.2 超臨界流體萃取(SFE)與超臨界流體色譜(SFC)
7.3.3 高效毛細管電泳色譜技術
8 溶藻細菌胞外溶藻活性物質的結構鑒定研究方法
8.1 紫外和可見光譜
8.2 紅外光譜
8.3 質譜
8.4 核磁共振
9. 本研究的主要內容
10. 本研究的意義
第二章 兩株溶解赤潮微藻的海洋溶解菌的分離與鑒定
摘要
1 引言
2 材料與方法
2.1 材料
2.1.1 主要實驗器材
2.1.2 藻種來源
2.1.3 培養(yǎng)基
2.1.4 藻種培養(yǎng)
2.2 方法
2.2.1 菌種的分離、篩選
2.2.2 藻細胞生長曲線的測定
2.2.3 藻菌相互作用關系曲線
2.2.4 藻細菌的16SrDNA測序
2.2.4.1 細菌基因組DNA的提取
2.2.4.2 純化回收
2.2.4.3 目的基因片段克隆
2.2.4.4 CaCl2法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞
3 菌種保藏
4. 實驗結果
4.1 裸甲藻分別與兩株菌不同濃度共培養(yǎng)的黃化現(xiàn)象
4.2 兩株細菌與藻共培養(yǎng)
4.3 兩株菌的電鏡觀察
4.4 兩株菌的16S r DNA序列
4.5 基于16SrDNA的兩株菌系統(tǒng)發(fā)育樹
4.6 兩株菌生理生化鑒定
5. 討論
6 小結
第三章 細菌HSB07活性物質的分離與研究
摘要
1 引言
2 實驗儀器與材料
2.1 主要儀器設備
2.2 實驗材料
2.2.1 供試藻種與菌種
2.2.2 培養(yǎng)基
3 試驗方法
3.1 小量發(fā)酵制備粗提物
3.1.1 小量發(fā)酵
3.1.2 制備粗提物
3.1.3 可行性分析
3.2 菌株HSB07代謝粗提物的制備
3.2.1 固體培養(yǎng)
3.2.2 液體培養(yǎng)
3.2.3 發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物制備
3.3 柱層析
3.3.1 TLC層析
3.3.2 硅膠柱
3.3.3 粗提物抑藻活性測定
3.3.4 凝膠柱層析
3.3.5 HPLC分析
3.3.6 核磁共振分析
3.3.7 質譜分析
4 實驗結果與分析
4.1 可行性分析
4.2 大量發(fā)酵的粗提物
4.3 硅膠柱分離
4.4 粗提物抑藻
4.5 凝膠柱層析
4.6 HPLC層析
4.7 活性組分#12氫譜分析
4.8 活性組分#12質譜分析
4.9 組分#4的氫譜
5 其他組分譜圖
第四章 細菌HSB07發(fā)酵條件優(yōu)化
1. 引言
2. 主要儀器設備
3. 發(fā)酵方案設計
4. 實驗結果
全文結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
致謝
本文編號:3836358
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