發(fā)布時間：2021-11-26 04:20

　　海洋生物污損是全球范圍內(nèi)的普遍現(xiàn)象,現(xiàn)行的抗污損毒性化合物,已經(jīng)對海洋環(huán)境和人類健康造成嚴重危害。天然無毒的抗污損化合物的開發(fā)是解決這一環(huán)境難題的主要途徑。海洋自身特殊的生態(tài)環(huán)境,使得生活其中的微生物代謝產(chǎn)物與陸源微生物不同,化合物結構獨特,生物活性多樣。海綿由于其獨特的化學防御機制,其共附生微生物的多樣性高,可產(chǎn)生具有顯著抗污損活性的次生代謝產(chǎn)物,成為抗污損活性天然產(chǎn)物的重要潛在來源。本文從美國華盛頓州圣璜島海域的8種海綿樣品分離的120株共附生微生物中,篩選出了11株細菌,其粗提物能有效抑制硅藻附著。對其中兩株活性菌株No.683和No.333進行了菌種鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化,并對菌株No.683的活性產(chǎn)物進行分離鑒定,為尋找抑制硅藻附著的活性海綿共附生微生物提供依據(jù)。本文的主要研究結果如下：1.采用顯微計數(shù)法對120株海綿共附生微生物進行了抗硅藻附著活性的篩選,結果顯示,11株菌有較好的活性,占總測試菌株的9.2%。在測試濃度為100μg/mL時,對5種測試硅藻的抑制率均大于90.0%。在所有活性菌株中,菌株No.683的效果最好,平均抑制率高達98.0%；No.333次之,平均抑制... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 文獻綜述
    1.1 研究背景
        1.1.1 海洋生物污損概述
        1.1.2 污損防治方法
    1.2 天然抗污損化合物研究
        1.2.1 天然抗污損化合物來源
            1.2.1.1 來源于海洋和陸地的植物的抗污損活性物質(zhì)
            1.2.1.2 來源于海洋無脊椎動物的抗污損活性物質(zhì)
            1.2.1.3 來源于海洋微生物的抗污損活性物質(zhì)
        1.2.2 海洋微生物中獲得的天然抗污損化合物的種類
            1.2.2.1 脂肪酸類
            1.2.2.2 異丁烯內(nèi)酯類
            1.2.2.3 環(huán)二肽類
            1.2.2.4 二羥基苯酸大環(huán)內(nèi)酯類
    1.3 海綿共附生微生物防污損研究現(xiàn)狀
        1.3.1 海綿的抗污損化合物概況
        1.3.2 海綿的抗污損化合物主要來源
        1.3.3 海綿共附生微生物的特點
    1.4 海洋天然抗污損活性化合物研究技術與方法
        1.4.1 抗硅藻附著天然活性產(chǎn)物研究
            1.4.1.1 抗硅藻附著天然活性產(chǎn)物的研究意義
            1.4.1.2 抗硅藻附著天然活性產(chǎn)物的篩選方法
                1.4.1.2.1 平板計數(shù)法
                1.4.1.2.2 抗硅藻附著圈指示法
                1.4.1.2.3 顯微計數(shù)法
        1.4.2 活性產(chǎn)物提取分離技術與方法
        1.4.3 活性產(chǎn)物的結構鑒定技術與方法
    1.5 論文的設計思路及研究目的
第二章 海綿共附生微生物抗硅藻附著活性菌株的篩選和鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 測試硅藻
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要試劑及常用溶液
    2.2 方法
        2.2.1 菌株發(fā)酵及粗提物的獲取
        2.2.2 硅藻培養(yǎng)
        2.2.3 抗硅藻附著活性的篩選
        2.2.4 活性菌株的鑒定
            2.2.4.1 形態(tài)學特征
            2.2.4.2 菌株的掃描電鏡分析
            2.2.4.3 菌株16S rDNA序列測定
    2.3 結果與分析
        2.3.1 抗硅藻附著活性菌株篩選結果
        2.3.2 抗硅藻附著活性菌株的鑒定
            2.3.2.1 No.683菌種鑒定
                2.3.2.1.1 菌株No.683形態(tài)學特征和掃描電鏡觀察
                2.3.2.1.2 菌株No.683 16S rDNA序列測定結果
            2.3.2.2 No.333菌種鑒定
                2.3.2.2.1 菌株No.333形態(tài)學特征和掃描電鏡觀察
                2.3.2.2.2 菌株No.333 16S rDNA序列測定結果
            2.3.2.3 No.683和No.333相似度對比
    2.4 本章小結
第三章 活性菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 發(fā)酵提取物的獲取
        3.2.2 抗硅藻附著活性的測定
        3.2.3 活性菌株發(fā)酵條件優(yōu)化的正交試驗設置
            3.2.3.1 正交試驗設置
            3.2.3.2 粗提物產(chǎn)量和抗硅藻附著活性測定
    3.3 結果與分析
        3.3.1 菌株No.683發(fā)酵條件優(yōu)化的正交試驗結果分析
            3.3.1.1 菌株No.683培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件的正交試驗設計結果分析
            3.3.1.2 菌株No.683粗提物產(chǎn)量和抗硅藻附著活性測定結果分析
        3.3.2 菌株No.333發(fā)酵條件優(yōu)化的正交試驗結果分析
            3.3.2.1 菌株No.333培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件的正交試驗設計結果分析
            3.3.2.2 正交試驗粗提物產(chǎn)量結果分析和最優(yōu)發(fā)酵條件確定
    3.4 本章小結
第四章 菌株No.683抗硅藻附著活性產(chǎn)物的分離鑒定
    4.1 材料
        4.1.1 供試菌株及硅藻
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 菌株No.683的批量發(fā)酵及發(fā)酵產(chǎn)物的提取
        4.2.2 菌株No.683發(fā)酵產(chǎn)物的分離純化
            4.2.2.1 粗提物的初步分離
            4.2.2.2 活性物質(zhì)的柱層析分離
                4.2.2.2.1 薄層層析
                4.2.2.2.2 硅膠柱分離
                4.2.2.2.3 反相減壓柱分離
            4.2.2.3 半制備HPLC型液相
        4.2.3 菌株發(fā)酵產(chǎn)物分離片段的抑制硅藻附著活性測試
        4.2.4 活性成分的鑒定
            4.2.4.1 HPLC分析
            4.2.4.2 核磁共振分析
            4.2.4.3 GC-MS分析
            4.2.4.4 脂肪酸分析
    4.3 結果
        4.3.1 菌株No.683的批量發(fā)酵及發(fā)酵產(chǎn)物的提取
        4.3.2 菌株No.683發(fā)酵產(chǎn)物的分離純化
            4.3.2.1 粗提物的初步分離
            4.3.2.2 活性物質(zhì)的柱層析分離
                4.3.2.2.1 薄層層析
                4.3.2.2.2 硅膠柱分離
                4.3.2.2.3 反相減壓柱分離
            4.3.2.3 HPLC分析
            4.3.2.4 半制備HPLC型液相
        4.3.3 活性成分的鑒定
            4.3.3.1 核磁共振分析
            4.3.3.2 GC-MS分析
            4.3.3.3 脂肪酸分析
    4.4 本章小結
第五章 總結
    5.1 結論
    5.2 討論
    5.3 展望
參考文獻
附錄
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3519384