隨著現代工農業(yè)的飛速發(fā)展,環(huán)境中的重金屬排放量日益增長,重金屬污染物進入水體通過參與復雜的水體生物地球化學循環(huán),導致海洋植物所面臨的生活環(huán)境日益嚴峻。潮間帶作為海洋與陸地的交界地帶,有其地理位置上的特殊性,微環(huán)境變化顯著,棲息于潮間帶中潮帶巖礁上或石沼內的潮間帶大型海藻因此也面臨著日益加劇的重金屬脅迫的壓力。近年來,蛋白質組學研究日益成熟,成為后基因組時代的重要研究領域。當前利用蛋白質組學對海洋生物的研究越來越受到學者們的關注,2-DE技術可以對不同環(huán)境脅迫下樣本進行比較研究,確定與處理效應相關的特異性蛋白,全面深刻地了解脅迫對生物體的各種影響。然而迄今為止,鮮見不同濃度銅離子脅迫下潮間帶大型海藻蛋白表達特異性變化的系統(tǒng)研究報道。因此,本文選擇煙臺沿海2種具代表性的潮間帶大型海藻小珊瑚藻（紅藻）和鼠尾藻（褐藻）作為實驗材料,采用蛋白質組學的方法和技術,分別對藻類的雙向電泳體系進行了系統(tǒng)的優(yōu)化,并對在重金屬脅迫下小珊瑚藻及鼠尾藻的差異蛋白通過雙向電泳技術進行了系統(tǒng)分析。通過分析Cu²⁺處理下海藻蛋白種類及表達豐度的變化,解析重金屬Cu²⁺濃度梯... 

【文章來源】：煙臺大學山東省

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

海洋中重金屬來源途徑Fig.1Sourcesofheavymetalsintheocean

煙臺大學碩士學位論文14mL+10%AP0.45mL+TEMED18μL，30%單體：29.1gAcr+0.9gBis定容至100ml），厚度為1mm的SDS-PAGE膠上端,進行垂直板電泳；電泳完成后，取下凝膠，采用硝酸銀染色法對凝膠進行染色。先固定1h（甲醇250mL+冰乙酸50mL+水200mL），再浸泡30min（無水乙醇150mL+無水乙酸鈉34g+硫代硫酸鈉1.25g+戊二醛2.5mL+水350mL），漂洗3次，每次5min，充分漂洗干凈，銀染30min（硝酸銀0.5g+甲醛0.4mL+水500mL注意遮光，盤倒扣），水洗1次，約30秒，顯色（無水碳酸鈉12.5g+甲醛0.2mL+水至500mL），1%醋酸終止。2.2.8圖像掃描及分析脫色后的凝膠立即放置在ImageScanner掃描儀(GEHealthcare)上進行掃描，掃描分辨率設置為300dpi。掃描圖像采用PDQuestAdvanced8.0.1分析軟件進行分析。2.3結果分析2.3.15種提取方法提取小珊瑚藻藻體總蛋白的電泳圖譜質量比較圖25種蛋白提取方法的雙向電泳圖譜Fig.22-DEmapsoffiveproteinsextractionmethodsa、b、c、d、e表示蛋白質的提取方法，分別為a:酚抽提法;b:TCA-丙酮沉淀法;c:Trizol提取蛋白法;d:Biozol提取蛋白法;e:飽和硫酸銨沉淀法，下同。本研究對常用的5種蛋白提取方法的雙向電泳圖譜效果進行了橫向比較及質量分析。飽和硫酸銨沉淀法提取的小珊瑚藻蛋白質雙向電泳極不理想，有片狀蛋白陰影出現，分離非常不徹底，雙向電泳效果極差(圖2e)。Biozol提取蛋白法所得圖譜在酸性區(qū)出現大片空白，幾乎無蛋白點出現，堿性區(qū)也只檢測到數目十分有限的蛋白點，蛋白點分離不徹底(圖2d)。Trizol提取蛋白法可分離出標志性蛋白斑點，但蛋白

煙臺大學碩士學位論文15點數較少，在堿性區(qū)有較多橫向條紋，影響蛋白質的分布及觀察(圖2c)。TCA-丙酮法所得到的圖譜分離效果較好，pH分布范圍較為合理，較飽和硫酸銨沉淀法、Trizol及Biozol三種方法，酸性區(qū)蛋白質點明顯增多且清晰，但仍有較多縱、橫向條紋(圖2b)。酚抽提法圖譜質量最高，蛋白純度得到有效提升，在酸性區(qū)及堿性區(qū)聚焦均較好，能檢測到的蛋白點最多，且形狀規(guī)則，無明顯縱、橫向條紋，達到理想的分離效果(圖2a)。2.3.25種提取方法所得圖譜蛋白質點數目差異及總蛋白濃度比較圖3不同提取方法的蛋白質點數及濃度比較Fig.3Comparisonofproteinnumbersandproteinconcentrationswithdifferentextractionmethodsa:酚抽提法;b:TCA-丙酮沉淀法;c:Trizol提取蛋白法;d:Biozol提取蛋白法;e:飽和硫酸銨沉淀法5種提取方法所得小珊瑚藻電泳圖譜蛋白質點數目見圖3A。由圖可知，飽和硫酸

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國珊瑚藻的多樣性及分布研究現狀[J]. 雷新明,黃暉,練健生,MCCOOK Laurence J.  熱帶海洋學報. 2019(04)
[2]基于質譜的定量蛋白質組學技術發(fā)展現狀[J]. 牟永瑩,顧培明,馬博,閆文秀,王道平,潘映紅.  生物技術通報. 2017(09)
[3]干旱脅迫下蒙古沙冬青葉片蛋白質組學研究[J]. 付晨熙,肖自華,高飛,周宜君.  生物技術通報. 2017(06)
[4]棒葉蕨藻變種對重金屬Cu2+、Pb2+和Cd2+脅迫的生理響應[J]. 王榮霞,黃敏,陳傅曉,譚圍.  漁業(yè)現代化. 2017(02)
[5]大頭典竹葉片蛋白質組學雙向電泳技術體系的優(yōu)化[J]. 陳思凱,瞿印權,楊德明,陳劍成,宋鯤鵬,劉家琪,何天友,榮俊冬,鄭郁善,陳禮光.  安徽農學通報. 2017(05)
[6]中國地表水重金屬污染的進展研究[J]. 謝曉君,王方園,王光軍,梅榮武,王長智.  環(huán)境科學與管理. 2017(02)
[7]福建柏葉片蛋白質雙向電泳技術優(yōu)化[J]. 楊德明,張婭欣,沈少炎,榮俊冬,何天友,鄭郁善.  森林與環(huán)境學報. 2017(01)
[8]海藻的開發(fā)現狀和應用前景[J]. 李丹,朱璐璐,錢爽,任浩.  廣州化工. 2016(21)
[9]玉米蛋白質組研究中雙向電泳技術條件的優(yōu)化[J]. 董婧,逯曉萍,呂二鎖,薛春雷,李俊偉.  華北農學報. 2016(04)
[10]MALDI-TOF MS在聚合物分析中的應用研究進展[J]. 王大剛,賴春花,倪江鵬,王雷,鄒繼兆.  分析儀器. 2016(03)

博士論文
[1]條斑紫菜光系統(tǒng)Ⅱ的分離鑒定及Rubisco的研究[D]. 高政權.中國科學院研究生院（海洋研究所） 2005

碩士論文
[1]幾種大型海藻對海水中重金屬污染的生物修復能力研究[D]. 呂利云.中國海洋大學 2013
[2]重金屬脅迫對斜生柵藻和銅綠微囊藻生長及葉綠素熒光特性研究[D]. 陳雷.南京農業(yè)大學 2009
[3]解淀粉芽孢桿菌YN-1抑制植物病原真菌活性物質研究[D]. 鄧建良.華中農業(yè)大學 2009
[4]富勒烯的DNA損傷機制及毒性效應研究[D]. 汪暢.華中農業(yè)大學 2008
[5]PSⅡ抑制型除草劑作用機理的生化與比較蛋白質組研究[D]. 李雪梅.天津師范大學 2007



本文編號：3253130