近年來,化石能源燃燒、森林砍伐等工農(nóng)業(yè)活動向大氣中排放了大量的CO₂,由此產(chǎn)生的溫室效應導致了表層海水溫度的持續(xù)升高;同時,海洋吸收了約1/3人類活動排放的CO₂,也導致了海水p H值的持續(xù)降低,這種現(xiàn)象被稱為海洋酸化,其被認為是繼“溫室效應”之后由CO₂過量排放而引起的又一全球性環(huán)境問題。此外,人類活動還向海洋中排放了大量的污染物,主要包括營養(yǎng)鹽類、重金屬、石油及石油類產(chǎn)品、抗生素、持久類有機污染物和塑料制品等,導致了近海環(huán)境的嚴重破壞,從而對海洋生物的生存和繁衍以及海洋生態(tài)系統(tǒng)的結構和功能構成了嚴重威脅。我國南海海域擁有豐富的珊瑚礁資源,具有重要的生態(tài)服務價值及經(jīng)濟價值;目前,我國的南海珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)正遭受著氣候變化和人類活動雙重因素的威脅,西沙群島珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中的活珊瑚比例已不足10%。大馬蹄螺（Trochus niloticus）作為南海珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中重要的植食性腹足類動物,其對大型底棲藻類的啃食作用可有效控制珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)中藻類的生物量,從而保證珊瑚在與藻類的生態(tài)位競爭中處于優(yōu)勢地位。本研究旨在評估南海珊瑚... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院煙臺海岸帶研究所)山東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術路線

第2章大馬蹄螺對海水酸化和熱應激復合暴露的生理響應13圖2.1大馬蹄螺血淋巴細胞計數(shù)的FITC直方圖注：A-陰性對照組；B-處理組Figure2.1FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisofthetotalhaemocytescountsinT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.4血淋巴細胞呼吸爆發(fā)使用血淋巴細胞內(nèi)的ROS產(chǎn)量來表示細胞內(nèi)的呼吸爆發(fā)作用。DCFH-DA可以自由進入細胞，并且在細胞內(nèi)經(jīng)過酯酶水解轉變?yōu)椴粠晒獾腄CFH，DCFH可以被細胞內(nèi)ROS氧化成為帶有綠色熒光的物質(zhì)DCF，其熒光強度可由流式細胞儀的FL1通道（綠色熒光）檢測，測定方法簡述如下：取500μLPBS緩沖液重懸的血淋巴細胞，加入5μLDCFH-DA母液使其在工作液中的最終濃度為0.01mmol/L，18℃避光孵育1小時后上流式細胞儀檢測。根據(jù)未加入探針的陰性處理樣品結果，確定綠色熒光強度的陽性范圍，統(tǒng)計各樣品陽性范圍中的細胞內(nèi)DCF綠色熒光強度的幾何平均值，即為細胞內(nèi)ROS含量（圖2.2）。

大馬蹄螺（Trochusniloticus）對海水酸化和熱應激/磺胺甲惡唑復合暴露的生理響應14圖2.2大馬蹄螺血淋巴細胞呼吸爆發(fā)的FITC直方圖注：A-陰性對照組；B-處理組。Figure2.2FITCcountshistogramplotyieldedbyflowcytometricanalysisyieldedbyflowcytometricanalysisofROSproductioninT.niloticusNote：A-Negativecontrol;B-Treatment.2.2.4.5血淋巴細胞凋亡率使用AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡試劑盒（碧云天），測定血淋巴細胞凋亡率。Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)的鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，其參與細胞內(nèi)的信號轉導，可以選擇性的結合細胞膜內(nèi)側的磷脂酰絲氨酸，而在細胞凋亡早期，各類細胞均會將磷脂酰絲氨酸翻到外側。使用綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin可識別這一重要特征；此外，碘化丙啶（PI）可以對壞死或細胞膜完整性受到破壞的細胞進行染色，即可區(qū)分樣品中處于凋亡早期狀態(tài)的細胞和壞死的細胞，具體測定方法簡述如下：使用500μL緩沖液重懸血淋巴細胞，加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPI染料，18℃下避光孵育20分鐘后使用流式細胞儀檢測，使用FL-1通道（綠色熒光）檢測AnnexinV-FITC，F(xiàn)L-2通道（紅色熒光）檢測PI。在實驗過程中，設置未添加染料的陰性對照組、僅加入FITC和PI的單染組以確定散點圖中十字門位置（圖2.3）。各樣品中的血淋巴細胞凋亡率結果采用FITC陽性和PI陰性（Q3）細胞數(shù)目占總細胞數(shù)目的百分比來表示。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3222886