【摘要】：本論文研究了利用辣根過氧化物酶(HRP)催化鄰氨基酚(OAP)與H2O2的反應,將毛細管電泳與酶聯(lián)免疫分析相結(jié)合,對兩種赤潮毒素(神經(jīng)性貝毒,NSP和西加魚毒素,CFP)進行了分別研究。在此基礎上,通過引入金納米粒子(AuNPs)作為標記物,實現(xiàn)了對四種貝類毒素(麻痹性貝毒(PSP)、腹瀉性貝毒(DSP)、記憶缺失性貝毒(ASP)以及神經(jīng)性貝毒(NSP))的同時分離和檢測。全文共分為七章: 第一章,概述了毛細管電泳的基本理論,介紹了酶聯(lián)免疫分析的研究進展以及赤潮毒素的研究現(xiàn)狀。 第二章,介紹了電化學檢測電極的改進方法以及聚乙烯醇和檸檬酸鈉混合制作涂層毛細管的技術,并研究了Pt電極的污染情況。 第三章,研究了毛細管電泳HRP—H2O2—OAP酶聯(lián)免疫分析電化學檢測平臺的建立,考察了包括運行緩沖溶液濃度和pH值、分離電壓、檢測電位、進樣條件在內(nèi)的各個實驗條件對HRP檢測的影響,確定了最佳檢測條件。在最佳檢測條件下,HRP的線性范圍為2.3×10~(-12)-3.5×10-10 mol/L,檢測限為1.09×10~(-12)mol/L,質(zhì)量檢測限可以達到zmol水平。 第四章,研究了使用HRP—H2O2—OAP體系的毛細管電泳—酶聯(lián)免疫分析新體系測定NSP的新方法。通過酶標抗原(Ag*)與抗體(Ab)的特異性反應,實現(xiàn)了對Ag*以及Ab-Ag*復合物的檢測;在此基礎上采用競爭免疫反應模式,實現(xiàn)了對實際扇貝樣品中NSP的定性和定量檢測。此方法對NSP測定的線性范圍為1.0-50.0 ng/mL,檢測限為0.1 ng/mL,比常規(guī)酶聯(lián)免疫法(ELISA)低4倍。 第五章,研究了基于膠體金放大技術毛細管電泳—酶聯(lián)免疫分析測定CFP及魚類樣品的新方法。利用AuNPs作為固相載體,將酶(HRP)和抗體(Ab)同時固定在其表面,得到了酶標抗體(Ab*),增加酶的固定量,提高檢測靈敏度。通過抗原(Ag)與Ab*的特異性反應,實現(xiàn)了對Ab*以及Ag-Ab*復合物的檢測;在此基礎上采用非競爭免疫反應模式,實現(xiàn)了對實際魚類樣品中CFP的定性和定量檢測。此方法對CFP測定的線性范圍為1.0-50.0 pg/mL,檢測限為0.3 pg/mL。 第六章,研究了基于納米金技術的毛細管電泳-酶聯(lián)免疫同時分離分析四種貝類毒素的新方法,通過引入AuNPs作為標記物,改變了原組分的遷移速率,使得原本無法完全分離的四種貝類毒素能夠很好的分離開來;再通過貝類樣品中的DSP、PSP、NSP毒素與酶標抗原Ag*競爭有限量的抗體,ASP毒素和相應Ab*反應,實現(xiàn)了對實際樣品中四種毒素的檢測。 結(jié)論部分,對全文內(nèi)容進行了總結(jié)。
【圖文】：

剖面對比圖：1，裸管；2，自制涂層管；3，進口涂管涂層前具有相同的截面尺寸，50 μm ID, 375 μm Oparison of capillary cross-section: 1, bare capillary; 2, h; 3, import coated capillary. All of the three capillaries horiginal size of 50 mm i.d., 375 mm o.d.使用效果法制作的涂層管分別安裝在分析裝置上，在相間 30 s，結(jié)果見圖 2-2。

將用不同方法制作的涂層管分別安裝在分析裝置上，，在相同條件下分析游離的 HRP，進樣時間 30 s，結(jié)果見圖 2-2。圖2-2 毛細管涂層前后運行效果對比：1. 裸管；2. 普通涂層管；3. 酸化涂層管。運行條件：分離毛細管50 μm i.d × 375 μm o.d × 40 cm； 反應毛細管長4 cm； 甘汞參比電極；運行緩沖溶液含Tris 5 mmol L 1, H2O25 mmol/L, L-蘇氨酸100 mmol L 1, HCl調(diào)制 pH 4.0；底物緩沖液含鄰苯二胺20 mmol L 1, Tris 20 mmol L 1, HCl調(diào)制 pH 4.0；高壓25 kV， 檢測 0.6V；進樣30 s；底物緩沖池高15 cm。Fig. 2-2. Electropherograms of free HRP with: 1, bare capillary; 2, polyvinyl alcoholcoatedcapillary; 3, acidized poly(vinyl alcohol) coated capillary.13
【學位授予單位】：青島科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：X55;X830

【參考文獻】

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1 張書圣,焦奎,季先鋒;高香草酸-H_2O_2-HRP熒光酶聯(lián)免疫分析測定HRP的研究[J];青島化工學院學報;1997年04期

2 方曉明,唐毅鋒,劉俊平;高效液相色譜/四極桿-飛行時間質(zhì)譜測定神經(jīng)性貝毒[J];色譜;2004年01期

本文編號：2688651