【摘要】：本論文研究了利用辣根過氧化物酶(HRP)催化鄰氨基酚(OAP)與H2O2的反應(yīng),將毛細(xì)管電泳與酶聯(lián)免疫分析相結(jié)合,對(duì)兩種赤潮毒素(神經(jīng)性貝毒,NSP和西加魚毒素,CFP)進(jìn)行了分別研究。在此基礎(chǔ)上,通過引入金納米粒子(AuNPs)作為標(biāo)記物,實(shí)現(xiàn)了對(duì)四種貝類毒素(麻痹性貝毒(PSP)、腹瀉性貝毒(DSP)、記憶缺失性貝毒(ASP)以及神經(jīng)性貝毒(NSP))的同時(shí)分離和檢測(cè)。全文共分為七章: 第一章,概述了毛細(xì)管電泳的基本理論,介紹了酶聯(lián)免疫分析的研究進(jìn)展以及赤潮毒素的研究現(xiàn)狀。 第二章,介紹了電化學(xué)檢測(cè)電極的改進(jìn)方法以及聚乙烯醇和檸檬酸鈉混合制作涂層毛細(xì)管的技術(shù),并研究了Pt電極的污染情況。 第三章,研究了毛細(xì)管電泳HRP—H2O2—OAP酶聯(lián)免疫分析電化學(xué)檢測(cè)平臺(tái)的建立,考察了包括運(yùn)行緩沖溶液濃度和pH值、分離電壓、檢測(cè)電位、進(jìn)樣條件在內(nèi)的各個(gè)實(shí)驗(yàn)條件對(duì)HRP檢測(cè)的影響,確定了最佳檢測(cè)條件。在最佳檢測(cè)條件下,HRP的線性范圍為2.3×10~(-12)-3.5×10-10 mol/L,檢測(cè)限為1.09×10~(-12)mol/L,質(zhì)量檢測(cè)限可以達(dá)到zmol水平。 第四章,研究了使用HRP—H2O2—OAP體系的毛細(xì)管電泳—酶聯(lián)免疫分析新體系測(cè)定NSP的新方法。通過酶標(biāo)抗原(Ag*)與抗體(Ab)的特異性反應(yīng),實(shí)現(xiàn)了對(duì)Ag*以及Ab-Ag*復(fù)合物的檢測(cè);在此基礎(chǔ)上采用競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)模式,實(shí)現(xiàn)了對(duì)實(shí)際扇貝樣品中NSP的定性和定量檢測(cè)。此方法對(duì)NSP測(cè)定的線性范圍為1.0-50.0 ng/mL,檢測(cè)限為0.1 ng/mL,比常規(guī)酶聯(lián)免疫法(ELISA)低4倍。 第五章,研究了基于膠體金放大技術(shù)毛細(xì)管電泳—酶聯(lián)免疫分析測(cè)定CFP及魚類樣品的新方法。利用AuNPs作為固相載體,將酶(HRP)和抗體(Ab)同時(shí)固定在其表面,得到了酶標(biāo)抗體(Ab*),增加酶的固定量,提高檢測(cè)靈敏度。通過抗原(Ag)與Ab*的特異性反應(yīng),實(shí)現(xiàn)了對(duì)Ab*以及Ag-Ab*復(fù)合物的檢測(cè);在此基礎(chǔ)上采用非競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)模式,實(shí)現(xiàn)了對(duì)實(shí)際魚類樣品中CFP的定性和定量檢測(cè)。此方法對(duì)CFP測(cè)定的線性范圍為1.0-50.0 pg/mL,檢測(cè)限為0.3 pg/mL。 第六章,研究了基于納米金技術(shù)的毛細(xì)管電泳-酶聯(lián)免疫同時(shí)分離分析四種貝類毒素的新方法,通過引入AuNPs作為標(biāo)記物,改變了原組分的遷移速率,使得原本無法完全分離的四種貝類毒素能夠很好的分離開來;再通過貝類樣品中的DSP、PSP、NSP毒素與酶標(biāo)抗原Ag*競(jìng)爭(zhēng)有限量的抗體,ASP毒素和相應(yīng)Ab*反應(yīng),實(shí)現(xiàn)了對(duì)實(shí)際樣品中四種毒素的檢測(cè)。 結(jié)論部分,對(duì)全文內(nèi)容進(jìn)行了總結(jié)。
【圖文】：

剖面對(duì)比圖：1，裸管；2，自制涂層管；3，進(jìn)口涂管涂層前具有相同的截面尺寸，50 μm ID, 375 μm Oparison of capillary cross-section: 1, bare capillary; 2, h; 3, import coated capillary. All of the three capillaries horiginal size of 50 mm i.d., 375 mm o.d.使用效果法制作的涂層管分別安裝在分析裝置上，在相間 30 s，結(jié)果見圖 2-2。

將用不同方法制作的涂層管分別安裝在分析裝置上，，在相同條件下分析游離的 HRP，進(jìn)樣時(shí)間 30 s，結(jié)果見圖 2-2。圖2-2 毛細(xì)管涂層前后運(yùn)行效果對(duì)比：1. 裸管；2. 普通涂層管；3. 酸化涂層管。運(yùn)行條件：分離毛細(xì)管50 μm i.d × 375 μm o.d × 40 cm； 反應(yīng)毛細(xì)管長(zhǎng)4 cm； 甘汞參比電極；運(yùn)行緩沖溶液含Tris 5 mmol L 1, H2O25 mmol/L, L-蘇氨酸100 mmol L 1, HCl調(diào)制 pH 4.0；底物緩沖液含鄰苯二胺20 mmol L 1, Tris 20 mmol L 1, HCl調(diào)制 pH 4.0；高壓25 kV， 檢測(cè) 0.6V；進(jìn)樣30 s；底物緩沖池高15 cm。Fig. 2-2. Electropherograms of free HRP with: 1, bare capillary; 2, polyvinyl alcoholcoatedcapillary; 3, acidized poly(vinyl alcohol) coated capillary.13
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：X55;X830

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張書圣,焦奎,季先鋒;高香草酸-H_2O_2-HRP熒光酶聯(lián)免疫分析測(cè)定HRP的研究[J];青島化工學(xué)院學(xué)報(bào);1997年04期

2 方曉明,唐毅鋒,劉俊平;高效液相色譜/四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定神經(jīng)性貝毒[J];色譜;2004年01期

本文編號(hào)：2688651