【摘要】：本研究選取我國(guó)近海常見(jiàn)的十九種赤潮藻為研究對(duì)象,通過(guò)免疫家兔制備了它們的多克隆抗體。對(duì)這些抗體進(jìn)行效價(jià)測(cè)定和特異性鑒定后,選取了特異性好的幾種分別建立了相應(yīng)海藻的間接競(jìng)爭(zhēng)型酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,并在模擬天然海水樣品的檢測(cè)中取得了比較理想的結(jié)果。 通過(guò)用旋鏈角毛藻細(xì)胞免疫小鼠、產(chǎn)蛋雞和家兔,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種動(dòng)物均產(chǎn)生了抗旋鏈角毛藻的多克隆抗體,不同的免疫程序?qū)贵w的產(chǎn)生和抗體的特異性影響不大。其中兔抗體制備的時(shí)間較短,效價(jià)高,且抗體的總量大,因此在十幾種赤潮藻的多克隆抗體制備過(guò)程中,采用家兔作為接受免疫的對(duì)象。對(duì)制備的十幾種赤潮藻的多克隆抗體分析后發(fā)現(xiàn),所有抗體均表現(xiàn)高親和力,效價(jià)最低的為6000,最高的達(dá)到69000;多數(shù)抗體特異性不好,與其他海藻顯示一定的交叉反應(yīng),但有幾種海藻的抗血清與其他海藻交叉反應(yīng)很小或者沒(méi)有;通過(guò)適當(dāng)?shù)奈椒忾]法處理多克隆抗體,可以有效降低某些多克隆抗體與其他海藻的交叉反應(yīng)。 本研究選取特異性較好、具有高效價(jià)的抗柔弱角毛藻抗血清、抗赤潮異彎藻抗血清、抗海洋原甲藻抗血清和抗紅色裸甲藻抗血清,分別建立了相應(yīng)海藻的競(jìng)爭(zhēng)型酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法�？谷崛踅敲蹇寡鍖�(duì)角毛藻屬旋鏈角毛藻、柔弱角毛藻、纖細(xì)角毛藻和微型角毛藻均可以很好的識(shí)別,具有一定的屬特異性,最低檢測(cè)數(shù)目達(dá)到51個(gè)細(xì)胞左右。其他三種抗血清均顯示種特異性,在競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)中,最低檢測(cè)細(xì)胞數(shù)目在幾十到幾百個(gè)之間,其中赤潮異彎藻和海洋原甲藻的最低檢測(cè)數(shù)目分別達(dá)到了77個(gè)和55個(gè)細(xì)胞左右。利用這些抗血清和ELISA方法,對(duì)幾份模擬海水樣品中的藻細(xì)胞進(jìn)行了定量檢測(cè),和光鏡直接計(jì)數(shù)的結(jié)果比較后發(fā)現(xiàn),兩者基本一致。此外,還對(duì)間接ELISA在浮游微藻檢測(cè)中的應(yīng)用作了初步探討。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：X55

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本文編號(hào)：2669415