本文關(guān)鍵詞：脂肪酶的無載體固定化及其性質(zhì)的研究

  更多相關(guān)文章： 脂肪酶 交聯(lián)酶聚體 牛血清白蛋白 表面活性劑 雜化納米

【摘要】：脂肪酶(LIPASE)是一種應(yīng)用廣泛的、高效的綠色生物催化劑,但是游離脂肪酶不夠穩(wěn)定、不能回收再利用等缺陷,限制了它的工業(yè)應(yīng)用,為了提高脂肪酶在實(shí)際應(yīng)用中的穩(wěn)定性,重復(fù)使用性。本文以牛胰脂肪酶(CATTLE PANCREATIC LIPASE,CPL)為研究對象,通過交聯(lián)酶聚體(CLEAS)技術(shù),制備了牛胰脂肪酶交聯(lián)酶聚集體(LIPASE-CLEAS),牛血清白蛋白牛胰脂肪酶交聯(lián)酶聚體(BSA-LIPASECLEAS),將脂肪酶界面激活與納米花固定化酶技術(shù)相結(jié)合制備了牛胰脂肪酶-磷酸銅-雜化納米花,并對三種固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。1)牛胰脂肪酶交聯(lián)酶聚集體制備條件的確定以及酶學(xué)性質(zhì)研究采用單因素方法對交聯(lián)劑濃度,沉淀劑用量,交聯(lián)時間進(jìn)行了優(yōu)化。確定LIPASE-CLEAS的最佳制備條件:硫酸銨飽和度80%,交聯(lián)劑終濃度1.5%,交聯(lián)時間1 H。在此條件下,酶活回收率達(dá)到最高。和游離脂肪酶相比,LIPASE-CLEAS最適催化溫度提高10℃。而且其溫度穩(wěn)定性、酸堿耐受性、儲存穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性有所提高。重復(fù)使用7次后,LIPASE-CLEAS仍能保持初始酶活的40%。2)牛血清白蛋白牛胰脂肪酶交聯(lián)酶聚體的制備及其酶學(xué)性質(zhì)研究采用單因素的方法對牛血清白蛋白濃度,交聯(lián)劑濃度,沉淀劑濃度,交聯(lián)時間進(jìn)行了優(yōu)化。獲得的優(yōu)化制備條件為:BSA的添加濃度為0.05 G/L,戊二醛質(zhì)量濃度為1%,(NH3)2SO4的飽和度為80%,交聯(lián)時間為2 H。在此條件下制備的BSALIPASE-CLEAS最大酶活回收率70%,比不添加BSA的LIPASE-CLEAS酶活回收率提高15%。與游離酶相比,BSA-LIPASE-CLEAS的最適反應(yīng)溫度提高了10℃,而且,BSA-LIPASE-CLEAS的溫度穩(wěn)定性、儲存穩(wěn)定性和P H穩(wěn)定性比游離酶和LIPASECLEAS都有較大提高。在重復(fù)使用8次后,BSA-LIPASE-CLEAS仍能保持初始酶活的80%,但LIPASE-CLEAS只保留了初始酶活的30%。3)表面活性劑界面激活脂肪酶磷酸銅雜化納米花的制備及其酶學(xué)性質(zhì)研究通過對脂肪酶濃度,硫酸銅添加量,以及表面活性劑濃度進(jìn)行優(yōu)化,獲得的界面激活雜化納米花的優(yōu)化制備條件為:十六烷基三甲基溴化銨濃度為0.25MMOL/L,脂肪酶濃度0.025 G/L,在300 ML磷酸緩沖體系(P H7.4,100 MMOL/L)中,120 MMOL/L硫酸銅添加量為2 M L。在此條件下,制備出的界面激活納米花的比酶活是游離酶的3.6倍,比未激活納米花高出7.7倍,重復(fù)使用8次后,界面激活納米花酶活力仍然保持初始酶活的100%。
【關(guān)鍵詞】：脂肪酶 交聯(lián)酶聚體 牛血清白蛋白 表面活性劑 雜化納米
【學(xué)位授予單位】：河北科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q814.2;TB383.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 緒論9-16
• 1.1 無載體固定化酶研究進(jìn)展9-13
• 1.1.1 無載體固定化酶介紹9-10
• 1.1.2 交聯(lián)酶聚體的研究背景和應(yīng)用前景10-11
• 1.1.3 牛血清白蛋白輔助交聯(lián)酶聚體的研究應(yīng)用前景11-12
• 1.1.4 磷酸銅雜化納米花的研究背景和應(yīng)用前景12-13
• 1.2 脂肪酶固定化研究進(jìn)展13-15
• 1.2.1 物理吸附法14
• 1.2.2 共價交聯(lián)法14
• 1.2.3 包埋法14-15
• 1.3 本研究的目的意義及主要研究內(nèi)容15-16
• 1.3.1 Lipase-CLEAs的制備15
• 1.3.2 BSA-Lipase-CLEAs的制備15
• 1.3.3 界面激活納米花15-16
• 第2章 脂肪酶交聯(lián)酶聚體的制備及催化性能16-27
• 2.0 引言16
• 2.1 材料與方法16-20
• 2.1.1 試驗試劑16-17
• 2.1.2 試驗儀器17
• 2.1.3 實(shí)驗方法17-20
• 2.2 結(jié)果與分析20-26
• 2.2.1 對硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線制備20
• 2.2.2 硫酸銨飽和度對Lipase-CLEAs酶活回收率的影響20-21
• 2.2.3 戊二醛質(zhì)量濃度對Lipase-CLEAs酶活回收率的影響21
• 2.2.4 交聯(lián)時間對Lipase-CLEAs酶活回收率的影響21-22
• 2.2.5 Lipase-CLEAs的形態(tài)觀察22-23
• 2.2.6 最適催化溫度的測定23
• 2.2.7 動力學(xué)常數(shù)的測定23-24
• 2.2.8 溫度穩(wěn)定性24
• 2.2.9 儲存穩(wěn)定性測定24-25
• 2.2.10 操作穩(wěn)定性測定25
• 2.2.11 Lipase－CLEAs重復(fù)使用性的測定方法25-26
• 2.3 本章小結(jié)26-27
• 第3章 牛血清白蛋白對牛胰脂肪酶交聯(lián)酶聚集體催化性能研究27-39
• 3.1 引言27
• 3.2 材料與方法27-30
• 3.2.1 材料與儀器27-28
• 3.2.2 實(shí)驗方法28-30
• 3.3 結(jié)果與討論30-37
• 3.3.1 固定化脂肪酶制備條件優(yōu)化30-32
• 3.3.2 固定化酶的形態(tài)觀察32-33
• 3.3.3 固定化酶最適催化溫度和動力學(xué)參數(shù)33-35
• 3.3.4 固定化酶催化穩(wěn)定性35-37
• 3.4 本章小結(jié)37-39
• 第4章 界面激活納米花制備及其研究39-52
• 4.1 引言39
• 4.2 材料與方法39-50
• 4.2.1 試驗試劑39-40
• 4.2.2 試驗儀器40
• 4.2.3 實(shí)驗方法40-42
• 4.2.4 結(jié)果與討論42-50
• 4.3 本章小結(jié)50-52
• 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的論文60-62
• 致謝62-64
• 個人簡歷64

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金主;劉超;譚少君;楊丹;徐軍慶;高艷華;李峰;袁建國;;發(fā)酵法生產(chǎn)脂肪酶的研究進(jìn)展[J];山東食品發(fā)酵;2010年02期

2 董純定,徐秀蘭,譚成云;藥用胰酶中脂肪酶活力測定[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;1988年01期

3 徐萬新,王俊國,宋玉卿;微生物胞外脂肪酶性質(zhì)的研究[J];吉林糧食高等專科學(xué)校學(xué)報;2000年01期

4 李品周;施碧紅;施巧琴;;脂肪酶穩(wěn)定性研究[J];化學(xué)與生物工程;2006年12期

5 閻金勇;楊江科;閆云君;;Galactomyces geotrichum Y25產(chǎn)脂肪酶條件的優(yōu)化[J];生物加工過程;2007年02期

6 王歡;何臘平;周換景;張義明;李翠芹;陶菡;;脂肪酶活力測定方法及其在篩選產(chǎn)脂肪酶微生物中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報;2013年01期

7 唐蕓;宋慶訓(xùn);李曉敦;沈亞領(lǐng);魏東芝;;十二節(jié)桿菌胞外脂肪酶的純化和性質(zhì)研究[J];工業(yè)微生物;2007年04期

8 周志林;胡鐵民;楊蘊(yùn)玉;仲濟(jì)華;王德培;施巧琴;;堿性脂肪酶生產(chǎn)工藝的研究[J];江蘇食品與發(fā)酵;1983年01期

9 惠明,趙坤,張星元;Eremothecium ashbyii T_(30)發(fā)酵產(chǎn)脂肪酶特性的研究[J];生物技術(shù);2001年05期

10 江慧芳;王雅琴;劉春國;;三種脂肪酶活力測定方法的比較及改進(jìn)[J];化學(xué)與生物工程;2007年08期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 閆麗娟;賀勝英;唐湘華;李俊俊;黃遵錫;;黑曲霉NJY-1脂肪酶基因的克隆及在畢赤酵母中的表達(dá)[A];飼用酶制劑開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)交流研討會論文集[C];2010年

2 鄭毅;吳朝娟;吳松剛;;脂肪酶活力檢測方法的研究[A];2004年全國生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

3 劉勝浩;林學(xué)政;劉晨臨;黃曉航;;南極細(xì)菌低溫脂肪酶在大腸桿菌中的高效表達(dá)[A];中國海洋學(xué)會海洋生物工程專業(yè)委員會2005年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

4 肖海群;段學(xué)輝;;脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其產(chǎn)酶特性研究[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

5 閆云君;蔡勇;楊江科;;基于易錯POR技術(shù)的短小芽胞桿菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向進(jìn)化[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國科協(xié)年會論文集（一）[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孟梟;脂肪酶的結(jié)構(gòu)修飾、分子識別機(jī)理解析及性能強(qiáng)化[D];浙江大學(xué);2014年

2 曹俊;結(jié)核分枝桿菌脂肪酶的功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 曹茜;脂肪酶高產(chǎn)菌的選育、酶的純化和表征以及兩種誘導(dǎo)方式產(chǎn)酶的機(jī)理研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 高蓓;變形桿菌屬脂肪酶的篩選、表征及基于理性設(shè)計的改造[D];華東理工大學(xué);2010年

5 彭仁;耐有機(jī)溶劑脂肪酶的篩選、重組表達(dá)及其催化特性研究[D];華東理工大學(xué);2010年

6 舒正玉;黑曲霉脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)、基因克隆與表達(dá)及結(jié)構(gòu)預(yù)測[D];華中科技大學(xué);2007年

7 張愛軍;熒光假單胞菌脂肪酶的克隆表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)及其在手性拆分中的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 苑博華;伯克霍爾德菌的篩選、鑒定及其發(fā)酵產(chǎn)低溫脂肪酶的研究[D];江南大學(xué);2010年

9 房耀維;Proteus Vulgaris T6脂肪酶分子定向進(jìn)化研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 賈彬;洋蔥伯克霍爾德菌的篩選、鑒定及其脂肪酶基因的高效表達(dá)[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王倩;脂肪酶SMG1的底物識別和熱穩(wěn)定性機(jī)制研究[D];華南理工大學(xué);2015年

2 杜萍萍;產(chǎn)脂肪酶菌株Serratia marcescens Lipa1318的分離鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化及其脂肪酶基因的克隆表達(dá)[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 林紅;基于基因組DNA信息分析挖掘新型脂肪酶[D];福建師范大學(xué);2015年

4 王作鎮(zhèn);依賴伴侶蛋白折疊的脂肪酶的細(xì)胞表面展示系統(tǒng)的初步構(gòu)建[D];福建師范大學(xué);2015年

5 劉海余;伯克霍爾德菌的篩選、脂肪酶基因的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究[D];廣西大學(xué);2015年

6 毛愷;脂肪酶產(chǎn)生菌F.Oxysporum_SHM的分離鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化[D];上海大學(xué);2015年

7 毛迪;一種嗜熱脂肪酶的表達(dá)、表征及機(jī)理研究[D];北京化工大學(xué);2015年

8 李文霞;脂肪酶Candida sp.99-125催化合成棉籽糖酯[D];北京化工大學(xué);2015年

9 張悅;嗜冷桿菌低溫脂肪酶分離純化及表征[D];大連理工大學(xué);2015年

10 朱婧;稻米脂肪酶基因工程菌的構(gòu)建及性質(zhì)研究[D];長沙理工大學(xué);2014年

，

本文編號：865639