發(fā)布時間：2017-08-03 07:01

  本文關(guān)鍵詞：基于金納米粒子的核酸適配體親和雜化整體柱的制備及其在蛋白質(zhì)分離富集中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 金納米粒子 核酸適配體 有機-無機雜化整體柱 酶催化

【摘要】：核酸適配體是一種能夠與目標(biāo)分析物發(fā)生特異性結(jié)合的寡核苷酸,具有親和力強、穩(wěn)定性好、易于化學(xué)修飾等優(yōu)點。有機.無機雜化整體柱是一種新型的整體柱材料,具有制備簡單、pH適用范圍廣、機械強度高等優(yōu)點。金納米粒子是一種廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域的納米材料,具有制備簡單、易于修飾、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。近年來,基于金納米粒子對整體柱材料進行表面功能化修飾的相關(guān)研究得到越來越多的關(guān)注,應(yīng)用于高效液相色譜、毛細(xì)管電泳、固相微萃取等不同領(lǐng)域。本文發(fā)展了一種基于金納米粒子的核酸適配體親和雜化整體柱的制備方法。首先,采用“一步法”制備帶有氨基功能基團的有機-無機雜化整體柱材料；然后,以金納米粒子為中間媒介,將核酸適配體修飾到整體柱材料表面,得到親和雜化整體柱：最后,利用該親和整體柱材料實現(xiàn)對目標(biāo)低豐度蛋白質(zhì)的分離、富集,并結(jié)合酶底物催化顯色反應(yīng)的方法,實現(xiàn)對目標(biāo)低豐度蛋白質(zhì)的痕量檢測。1.基于金納米粒子的核酸適配體親和雜化整體柱的制備通過“一步法”縮聚反應(yīng)制備帶有氨基功能基團的有機-無機雜化整體柱,以金納米粒子為中間媒介,制備基于金納米粒子的核酸適配體整體柱材料。該材料具有較好的機械強度、通透性以及穩(wěn)定性。同時,“一步法”的引入大大簡化金納米粒子整體柱材料的制備過程。通過多種類型掃描電子顯微鏡、X射線能譜儀、傅立葉紅外光譜儀對整體柱材料進行了一系列的表征。結(jié)果表明,氨基雜化柱具有較高含量的氨基基團,氮含量為13.3%(w/w)：金納米粒子穩(wěn)固地附著于整體柱表面,并且金元素含量很高,為74.9%(w/w)；適配體也成功修飾到整體柱材料上,修飾密度為342 pmol/μL。2.低豐度蛋白質(zhì)的分離、富集與檢測本文選取凝血酶作為目標(biāo)低豐度蛋白質(zhì),利用親和雜化整體柱對凝血酶樣品進行分離與富集,并結(jié)合酶底物催化顯色反應(yīng),實現(xiàn)對痕量凝血酶的高靈敏和高特異性檢測。在簡單基質(zhì)中,親和雜化整體柱可以實現(xiàn)對于凝血酶的5倍富集,檢測限達到2 nM。在相對復(fù)雜的基質(zhì)中,該方法對凝血酶的檢測回收率為89.9%。這些結(jié)果表明,基于適配體親和整體柱材料和酶底物催化反應(yīng)的結(jié)合,可以實現(xiàn)對目標(biāo)低豐度蛋白質(zhì)凝血酶的分離、富集與檢測。
【關(guān)鍵詞】：金納米粒子 核酸適配體 有機-無機雜化整體柱 酶催化
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;TB383.1
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 緒論11-32
• 1.1 有機-無機雜化整體柱11-18
• 1.1.1 有機整體柱11-13
• 1.1.2 無機整體柱13-14
• 1.1.3 有機-無機雜化整體柱14-18
• 1.2 核酸適配體18-24
• 1.2.1 核酸適配體特點18-19
• 1.2.2 核酸適配體在分析化學(xué)方面的應(yīng)用19-21
• 1.2.3 核酸適配體固載技術(shù)21-24
• 1.3 納米金修飾整體柱24-27
• 1.4 本論文內(nèi)容27-28
• 參考文獻28-32
• 第二章 基于金納米粒子的適配體功能化整體柱的制備與表征32-41
• 2.1 引言32-33
• 2.2 實驗部分33-35
• 2.2.1 試劑與材料33
• 2.2.2 實驗儀器33-34
• 2.2.3 “一步法”制備氨基化有機-無機雜化整體柱34
• 2.2.4 核酸適配體功能化金納米的制備34
• 2.2.5 基于納米金的核酸適配體功能化整體柱的制備34-35
• 2.3 結(jié)果與討論35-39
• 2.3.1 “一步法”氨基化有機-無機雜化整體柱35-36
• 2.3.2 適配體功能化的雜化整體柱36-39
• 2.4 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-41
• 第三章 適配體功能化整體柱用于凝血酶的富集與檢測41-52
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實驗部分42-44
• 3.2.1 試劑與材料42
• 3.2.2 實驗儀器42-43
• 3.2.3 基于酶底物反應(yīng)的凝血酶標(biāo)準(zhǔn)曲線43
• 3.2.4 核酸適配體親和雜化整體柱對凝血酶的富集43
• 3.2.5 特異性實驗和人血清中凝血酶的回收實驗43-44
• 3.3 結(jié)果與討論44-49
• 3.3.1 洗脫條件優(yōu)化44-45
• 3.3.2 核酸適配體親和雜化整體柱對凝血酶分離富集檢測的評價45-48
• 3.3.3 特異性測試和人血清樣本中凝血酶的回收48-49
• 3.4 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 谷從影,藺麗,方能虎;整體柱的制備及應(yīng)用進展[J];化學(xué)研究與應(yīng)用;2005年03期

2 鮑笑嶺;許旭;;高效液相色譜整體柱技術(shù)的進展[J];分析化學(xué);2005年11期

3 黃曉佳;黃本立;;離子交換整體柱材料的研究進展[J];色譜;2007年03期

4 呂志亮;賈麗;;硅膠整體柱的制備與應(yīng)用研究進展[J];分析試驗室;2008年S2期

5 鄒漢法;吳明火;王方軍;吳仁安;葉明亮;;整體柱制備技術(shù)的新進展及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用[J];色譜;2009年05期

6 楊靜;楊更亮;劉海燕;張巧霞;;強陽離子多孔整體柱用于生物大分子的分離[J];化學(xué)通報;2010年04期

7 任呼博;柳仁民;;硅膠整體柱制備條件的優(yōu)化及性能評價[J];華東師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年02期

8 嚴(yán)逢川;陳波;;干凝膠無機整體柱的制備及評價[J];色譜;2011年05期

9 李金祥;王嬌;韓晶;蔡廣祥;;一種有機聚合物包覆硅球強陽離子交換整體柱的制備[J];化學(xué)工程與裝備;2012年03期

10 雷環(huán);楊更亮;;有機-無機雜化整體柱對雞卵清中溶菌酶的分離[J];科技風(fēng);2012年23期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉麗娜;周吉;任華華;劉嬋;葉勇;;納米金修飾的聚合物整體柱制備及其表面增強拉曼光譜研究[A];第十七屆全國分子光譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

2 鄒漢法;謝傳輝;封順;蔣小崗;靳文海;陳學(xué)國;厲欣;葉明亮;;毛細(xì)管整體柱技術(shù)在高通量蛋白質(zhì)組分析中的應(yīng)用[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

3 楊更亮;王利娟;;整體柱研究進展[A];第十五次全國色譜學(xué)術(shù)報告會文集（上冊）[C];2005年

4 王斐;耿信篤;;甲基丙烯酸丁酯整體柱的合成及評價[A];首屆中國中西部地區(qū)色譜學(xué)術(shù)交流會暨儀器展覽會論文集[C];2006年

5 徐蘭英;施治國;馮鈺，

本文編號：613084