在駱駝科(Camelid)動(dòng)物的血清中存在一種天然缺失輕鏈的單域重鏈抗體(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)。VHH僅由重鏈抗體可變區(qū)(Variable region)組成的基因工程抗體,由于分子量小,也稱為也稱為納米抗體。與普通抗體及重組單鏈抗體(single chain fragment variable,scFv)相比,VHH具有分子小、水溶性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、易于表達(dá)等優(yōu)點(diǎn),因此具有廣闊的應(yīng)用前景。甲胎蛋白分子量69 KDa,成人血漿中含量低于30 ng/m L。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí),AFP在血清中的含量會(huì)明顯升高,甲胎蛋白就成了診斷原發(fā)性肝癌的一個(gè)特異性臨床指標(biāo),臨床檢測閾值為400 ng/mL。本研究運(yùn)用納米抗體,建立了基于雙納米抗體的夾心免疫PCR檢測AFP,該方法靈敏度高、線性范圍廣。主要研究內(nèi)容如下:1、AFP羊駝免疫庫的構(gòu)建。AFP免疫羊駝,采取四免血液,分離白細(xì)胞,提取RNA。以RNA為模板,反轉(zhuǎn)錄構(gòu)建cDNA文庫。通過巢式PCR,擴(kuò)增目的VHH基因。利用限制性內(nèi)切酶EcolⅠ和SfiⅠ...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviations）
第1章 綜述
    1.1 前言
    1.2 甲胎蛋白研究進(jìn)展
    1.3 納米抗體
    1.4 納米抗體的應(yīng)用
    1.5 噬菌體展示技術(shù)
    1.6 熒光免疫PCR技術(shù)
    1.7 外源基因原核表達(dá)
    1.8 研究內(nèi)容及意義
第2章 羊駝AFP免疫納米抗體庫的構(gòu)建
    2.1 材料、儀器和試劑
    2.2 方法與步驟
    2.3 結(jié)果與分析
    2.4 小結(jié)
第3章 AFP納米抗體的淘選與鑒定
    3.1 材料、儀器和試劑
    3.2 方法與步驟
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
    3.4 小結(jié)
第4章 AFP納米抗體的表達(dá)與鑒定
    4.0 技術(shù)路線
    4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備以及試劑
    4.2 試驗(yàn)方法
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
    4.4 小結(jié)
第5章 基于納米抗體建立AFP熒光免疫PCR檢測方法
    5.0 技術(shù)路線
    5.1 材料、儀器以及試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 小結(jié)
第6章 討論
    6.1 庫容量主要的影響因素
    6.2 淘選策略討論
    6.3 噬菌體序列分析
    6.4 納米抗體的原核表達(dá)
    6.5 免疫PCR方法的建立
第7章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間研究成果



本文編號(hào)：3839349