骨組織工程技術(shù)是目前公認的最有希望修復(fù)骨缺陷的治療方法之一。生物反應(yīng)器是獲取大量骨組織種子的重要途徑。微球具有較大的比表面積,短時間細胞可以在微球表面大量增殖。并且培養(yǎng)過程中添加微載體就可以完成細胞的傳代,避免了傳統(tǒng)培養(yǎng)方法中使用胰酶消化對細胞的損害。但是目前商業(yè)化的微載體降解能力差,價格昂貴。因此,研制優(yōu)質(zhì)微載體生物材料仍是當(dāng)前研究熱點。本研究通過使用致孔劑聯(lián)合乳化揮發(fā)法制備出聚乳酸(Polylactide, PLA)和納米羥基磷灰石/聚乳酸(Nano-Hydroxyapatiten/ Polylactide, nHAP/PLA)中空多孔微球,考察不同的微球的物化性質(zhì),并將成骨細胞(Osteoblasts, OBs)接種在微球上,考察微球的生物相容性,以期制備出最適合成骨細胞生長的微球。以二氯甲烷(CH2C12)為溶劑,明膠為分散劑,NH4HCO3為致孔劑制備中空多孔的PLA微球。微球的粒徑大小和粒徑分布受聚乳酸濃度、分散劑濃度、復(fù)乳攪拌速度和致孔劑濃度等因素影響。采用相同工藝制備了nHAP/PLA微球,通過比較不同nHAP加入量微球的表面形貌、吸水率、接觸角和懸浮能力,篩選出最適合...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 骨組織工程種子細胞的研究進展
    1.2 生物反應(yīng)器
    1.3 微載體制備研究現(xiàn)狀
        1.3.1 微載體的性能要求
        1.3.2 常用微載體
        1.3.3 多孔微載體的制備方法
        1.3.4 PLA微球
        1.3.5 納米羥基磷灰石及其復(fù)合材料
    1.4 選題依據(jù)及研究內(nèi)容
2 PLA微球的制備工藝
    2.1 實驗儀器與材料
        2.1.1 實驗藥品
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 聚乳酸空心多孔微球的制備
        2.2.2 單因素分析制備聚乳酸微球
        2.2.3 微球形態(tài)觀察
        2.2.4 微球支架的粒徑分布
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 中空多孔微球形成機理
        2.3.2 聚乳酸制備各因素的影響
    2.4 本章小結(jié)
3. 納米羥基磷灰石/聚乳酸空性多孔微球的制備
    3.1 實驗儀器與材料
        3.1.1 實驗藥品
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 納米羥基磷灰石/聚乳酸空心多孔微球的制備
        3.2.2 微球形態(tài)觀察
        3.2.3 HA/PLA接觸角測試
        3.2.4 BSA蛋白吸附實驗
        3.2.5 微球沉降性標(biāo)準(zhǔn)
        3.2.6 試驗設(shè)計
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 納米羥基磷灰石形態(tài)及粒徑
        3.3.2 微球形態(tài)觀察
        3.3.3 紅外檢測
        3.3.4 正交實驗結(jié)果及分析
    3.4 小結(jié)
4 納米羥基磷灰石/聚乳酸空心多孔微球細胞復(fù)合物的構(gòu)建
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗儀器與設(shè)備
        4.1.2 藥品與試劑
    4.2 成骨細胞的原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
        4.2.1 成骨細胞的原代培養(yǎng)
        4.2.2 成骨細胞的傳代培養(yǎng)
        4.2.3 成骨細胞的純化
        4.2.4 成骨細胞的形態(tài)學(xué)檢測
        4.2.5 成骨細胞體外礦化能力檢測
    4.3 微球的成骨細胞反應(yīng)檢測
        4.3.1 納米羥基磷灰石/聚乳酸微球接種成骨細胞
        4.3.2 微球上成骨細胞活性及形態(tài)檢測
    4.4 成骨細胞培養(yǎng)及鑒定實驗結(jié)果
        4.4.1 原代及傳代培養(yǎng)結(jié)果
        4.4.2 成骨細胞的生物學(xué)性能檢測
    4.5 細胞實驗結(jié)果
        4.5.1 成骨細胞黏附率
        4.5.2 CCK8細胞活性檢測
        4.5.3 微球上細胞生長情況
        4.5.4 成骨細胞功能檢測
    4.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況



本文編號：3756884