發(fā)布時(shí)間：2017-05-16 17:05

  本文關(guān)鍵詞：基質(zhì)金屬蛋白酶響應(yīng)性納米載藥體系的建立及評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：理想的腫瘤靶向治療要同時(shí)達(dá)到“很好的治療效果”和“很低的毒副作用”,靶向藥物載體是腫瘤靶向治療的研究熱點(diǎn)之一。為了達(dá)到上述的效果,設(shè)計(jì)出在腫瘤組織可控性、程序性釋放藥物的載體迫在眉睫。結(jié)合腫瘤微環(huán)境研究和表面工程化技術(shù)的最新進(jìn)展,在本論文中,我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列腫瘤微環(huán)境響應(yīng)性的納米載藥系統(tǒng)。本論文主要內(nèi)容分為如下兩個(gè)部分：1、首先我們合成了針對(duì)腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)響應(yīng)的共聚物(mPEG-Pep-PCL)和葉酸靶向的共聚物(FA-PEG-PCL),使用納米沉淀法將共聚物制備成納米尺寸,負(fù)載喜樹堿的藥物載體。制備的藥物載體是一種球形的類三明治結(jié)構(gòu),其中最外層為可在MMPs高表達(dá)環(huán)境下斷裂的長(zhǎng)鏈聚乙二醇(PEG),中間層為帶葉酸的短鏈PEG,內(nèi)核為疏水的聚己內(nèi)酯(PCL)用于負(fù)載喜樹堿。在MMP2/9存在下,最外層PEG能快速脫落,露出中間的葉酸分子,使藥物靶向輸送到腫瘤細(xì)胞。然后,我們對(duì)納米粒子的理化性質(zhì)包括表面形貌、載藥率和藥物體外釋放情況進(jìn)行了研究。最后,我們進(jìn)一步通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種納米載體有很好的生物相容性,能夠高效的將喜樹堿遞送到腫瘤組織,從而達(dá)到較好的治療效果和較低的毒副作用的設(shè)計(jì)初衷。2、利用載體對(duì)腫瘤細(xì)胞信號(hào)的響應(yīng)、抗體和腫瘤細(xì)胞的相互作用,構(gòu)建了具有MMPs分子響應(yīng)和激活Fas-FasL凋亡通路的智能型納米粒子。這種納米粒子具有類三明治的核-殼結(jié)構(gòu),將MMPs向應(yīng)性的肽段插入到長(zhǎng)鏈PEG和PCL之間,通過偶聯(lián)anti-Fas抗體和負(fù)載化療藥物喜樹堿,程序性地釋放抗體和小分子藥物到腫瘤組織,模仿毒性T細(xì)胞的功能激活Fas-FasL凋亡通路從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這種藥物載體具有MMPs向應(yīng)性和抑制腫瘤功能。最后通過病理分析揭示了這類納米載體在體內(nèi)能很好地抑制腫瘤生長(zhǎng)主要是因?yàn)閍nti-Fas抗體和喜樹堿的協(xié)同作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。本設(shè)計(jì)為新型的靶向性免疫療法聯(lián)合化療提供了一種新的策略。
【關(guān)鍵詞】：基質(zhì)金屬蛋白酶 納米載藥體系 葉酸靶向 喜樹堿投遞 Fas-FasL凋亡通路 抗腫瘤協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：TQ460.1;TB383.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第一章 緒論13-22
• 1.1 載藥系統(tǒng)的定義及分類13-14
• 1.2 納米藥物靶向投遞策略概述14-18
• 1.2.1 被動(dòng)靶向14-16
• 1.2.1.1 EPR效應(yīng)14-15
• 1.2.1.2 細(xì)胞攝取15-16
• 1.2.2 主動(dòng)靶向16
• 1.2.3 刺激-響應(yīng)性靶向16-18
• 1.2.3.1 溫度敏感的納米藥物載體17
• 1.2.3.2 超聲療法17
• 1.2.3.3 磁療17-18
• 1.2.3.4 pH敏感的藥物載體18
• 1.2.3.5 酶響應(yīng)性的藥物載體18
• 1.3 MMPs的一般特性和作為響應(yīng)性條件的優(yōu)勢(shì)18-20
• 1.3.1 MMPs的結(jié)構(gòu)與命名18-19
• 1.3.2 MMPs在惡性腫瘤中發(fā)生發(fā)展的角色19
• 1.3.3 MMPs刺激-響應(yīng)性藥物載體的優(yōu)勢(shì)19-20
• 1.4 本文的主要內(nèi)容和創(chuàng)新方面20-22
• 第二章 基質(zhì)金屬蛋白酶響應(yīng)和葉酸受體靶向的納米載藥體系的建立和評(píng)價(jià)22-46
• 2.1 引言22-26
• 2.1.1 基質(zhì)金屬酶響應(yīng)和葉酸受體靶向的高分子納米載藥體系的優(yōu)勢(shì)22-23
• 2.1.2 載體材料的選擇和設(shè)計(jì)思路23-26
• 2.1.2.1 嵌段共聚物骨架的選擇23-24
• 2.1.2.2 聚己內(nèi)酯的性質(zhì)和制備方法24
• 2.1.2.3 載體材料的合成思路24-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分26-32
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料26
• 2.2.2 嵌段共聚物的合成26-28
• 2.2.2.1 聚合管的處理26-27
• 2.2.2.2 辛酸亞錫溶液的配制27
• 2.2.2.3 PCL-NH_2的合成27
• 2.2.2.4 PCL-PEG-NH_2的合成27
• 2.2.2.5 mPEG-Pep-PCL和FA-PEG-PCL的合成27-28
• 2.2.3 負(fù)載喜樹堿納米粒子的制備28
• 2.2.4 聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)表征28-29
• 2.2.5 納米粒子形貌和粒徑的測(cè)定29
• 2.2.6 納米粒子明膠酶響應(yīng)性的微觀水平驗(yàn)證29
• 2.2.7 納米粒子載藥量和載藥效率的測(cè)定29
• 2.2.8 負(fù)載喜樹堿納米粒子的體外釋放29-30
• 2.2.9 細(xì)胞系和動(dòng)物30
• 2.2.10 納米載藥粒子細(xì)胞毒性的測(cè)定30
• 2.2.11 納米載藥粒子細(xì)胞內(nèi)響應(yīng)方式和靶向能力的研究30-31
• 2.2.12 載藥納米粒子的體內(nèi)抗腫瘤效果31
• 2.2.12.1 小鼠腫瘤模型的建立31
• 2.2.12.2 載藥納米粒子的體內(nèi)抗腫瘤效果31
• 2.2.13 載藥納米粒子的體內(nèi)分布研究31-32
• 2.2.13.1 荷B16黑色素瘤小鼠組織中CPT含量測(cè)定方法的建立31-32
• 2.2.13.2 納米藥物在小鼠主要組織中的分布情況32
• 2.3 結(jié)果與討論32-44
• 2.3.0 mPEG-Pep的合成32-33
• 2.3.1 mPEG-Pep-PCL和FA-PEG-PCL的合成33-36
• 2.3.1.1 PCL-NH_2和PCL-PEG-NH_2的合成33-34
• 2.3.1.2 mPEG-Pep-PCL和FA-PEG-PCL的合成34-36
• 2.3.2 納米粒子的制備與表征36-38
• 2.3.3 納米粒子響應(yīng)方式的微觀驗(yàn)證38-39
• 2.3.4 納米粒子的載藥情況和體外釋放表征39-40
• 2.3.5 細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)40-41
• 2.3.6 納米粒子的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)41-42
• 2.3.7 體內(nèi)抗腫瘤效果42-43
• 2.3.8 喜樹堿的體內(nèi)組織分布43-44
• 2.4 本章小結(jié)44-46
• 第三章 ：增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞Fas-FasL凋亡通路的響應(yīng)性納米載體的制備與抗腫瘤效果研究46-65
• 3.1 前言46-48
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分48-54
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器48
• 3.2.2 共聚物mPEG-Pep-PCL和COOH-PEG-PCL的合成48-49
• 3.2.2.1 mPEG-Pep-PCL的合成48-49
• 3.2.2.2 PEG-PCL-COOH的合成49
• 3.2.3 負(fù)載喜樹堿納米粒子的制備49-50
• 3.2.4 anti-Fas抗體與納米粒子的偶聯(lián)反應(yīng)50
• 3.2.5 聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)表征50
• 3.2.6 納米粒子形貌和粒徑的測(cè)定50-51
• 3.2.7 明膠酶引起的納米粒子形貌變化的微觀水平驗(yàn)證51
• 3.2.8 納米粒子載藥量和載藥效率的測(cè)定51
• 3.2.9 細(xì)胞系和動(dòng)物51
• 3.2.10 細(xì)胞對(duì)熒光納米粒子的攝取實(shí)驗(yàn)51-52
• 3.2.11 納米粒子的體外細(xì)胞毒性52
• 3.2.12 納米藥物對(duì)細(xì)胞凋亡作用的影響52
• 3.2.13 Caspase蛋白的檢測(cè)52-53
• 3.2.14 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)53-54
• 3.2.14.1 體內(nèi)抗腫瘤效果研究53-54
• 3.2.14.2 腫瘤組織的病理學(xué)研究54
• 3.3 結(jié)果與討論54-63
• 3.3.1 共聚物的制備與表征54-55
• 3.3.1.1 mPEG-Pep-PCL的制備與表征54
• 3.3.1.2 PCL-PEG-COOH的制備與表征54-55
• 3.3.2 納米顆粒的形貌和粒徑大小55-56
• 3.3.3 明膠酶響應(yīng)性的形貌變化56-57
• 3.3.4 納米粒子的載藥效率和載藥率57-58
• 3.3.5 納米粒子的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)58-59
• 3.3.6 納米藥物對(duì)B16的細(xì)胞毒性59
• 3.3.7 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)分析59-61
• 3.3.8 Western Blot結(jié)果61
• 3.3.9 體內(nèi)抗腫瘤效果研究61-62
• 3.3.10 病理組織學(xué)研究結(jié)果62-63
• 3.4 本章結(jié)論63-65
• 總結(jié)與展望65-66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 致謝72-73
• 已經(jīng)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張景R，

本文編號(hào)：371403