目的:納米氧化鋅顆粒由于其獨(dú)特的物理和化學(xué)性質(zhì),在越來越多的領(lǐng)域中被應(yīng)用,然而關(guān)于其生物安全性研究較少。最新研究表明高濃度納米氧化鋅顆粒可以通過氧化應(yīng)激效應(yīng)抑制腫瘤的發(fā)展,然而在類似環(huán)境暴露的低濃度納米氧化鋅顆粒誘導(dǎo)下,其對(duì)癌癥細(xì)胞的抑制效應(yīng)和相應(yīng)機(jī)制尚不明確。由于納米氧化鋅顆粒尿路排泄的特點(diǎn),我們檢測(cè)了三種泌尿系腫瘤細(xì)胞在低濃度亞致死劑量的氧化鋅顆粒暴露下組蛋白修飾調(diào)控的機(jī)制,以及相應(yīng)的修飾酶和下游靶基因的表達(dá)變化,并探究相應(yīng)生物學(xué)行為的改變。方法:體外培養(yǎng)A498腎癌細(xì)胞系,DU145前列腺癌細(xì)胞系以及T24膀胱癌細(xì)胞系,通過MTT實(shí)驗(yàn)及AlamarBlue cell viability實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度氧化鋅顆粒對(duì)此三種細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng),篩選出用于研究的亞致死濃度。為了探索選定濃度下的納米氧化鋅對(duì)腫瘤細(xì)胞表觀遺傳效應(yīng)的影響,在暴露處理細(xì)胞48小時(shí)后,提取細(xì)胞mRNA及總蛋白,通過q-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)4種與組蛋白修飾相關(guān)酶的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平,選定T24細(xì)胞中濃度依賴的的修飾酶（EZH2）作為研究對(duì)象,并檢測(cè)了在暴露處理前后相應(yīng)修飾位點(diǎn)（H3K27me3）的表達(dá)... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

氧化鋅顆粒TEM圖?

A498DU145 和膀胱癌細(xì)胞系 T24。為了選擇納米氧化鋅顆粒暴露 48 小時(shí)后的非致死濃度，我們通過 Alamar Blue 實(shí)驗(yàn)（圖 1.2A）和 MTT 實(shí)驗(yàn)（圖 1.2B）對(duì)此進(jìn)行了評(píng)價(jià)。如圖所示，MTT 實(shí)驗(yàn)和 Alamar Blue 實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為一致，我們選取的泌尿系統(tǒng)三種癌細(xì)胞在不同氧化鋅濃度處理下增值都受到抑制，且所有細(xì)胞均存在一個(gè)劑量依賴的毒性效應(yīng)，即隨著氧化鋅顆粒濃度升高，抑制效應(yīng)越明顯。此外，Alamar Blue 實(shí)驗(yàn)顯示氧化鋅顆粒對(duì)不同細(xì)胞的毒性效應(yīng)不同，三種細(xì)胞系中，DU145 對(duì)氧化鋅顆粒敏感性最低，A498 對(duì)氧化鋅顆粒敏感性最高。當(dāng)氧化鋅顆粒暴露 48h 后，在濃度為 10ug/mL 時(shí)，對(duì) A498 細(xì)胞系的抑制率約達(dá)21％（P<0.05），且該細(xì)胞系半抑制濃度約為 20ug/mL；而在氧化鋅顆粒濃度為10ug/mL 且暴露 48h 后，DU145 和 T24 都沒有顯著受到毒性作用（P>0.05），直至濃度上升至15ug/mL，DU145和T24這兩種細(xì)胞抑制率分別到達(dá)10％和14％（P<0.05）。因此，我們選擇 1ug/mL 至 10ug/mL 這個(gè)濃度作為研究濃度，以用來氧化鋅顆粒對(duì)細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)，同時(shí)確保該濃度下氧化鋅顆粒對(duì)細(xì)胞的毒性效應(yīng)最小，不產(chǎn)生其他額外的毒副作用。DU145 T24

用 Western Blot 法檢測(cè)這四種酶類的蛋白表達(dá)水平（圖1.3A）。結(jié)果顯示僅有 T24 細(xì)胞中的 EZH2 蛋白顯示出濃度依賴性的變化，即隨著氧化鋅顆粒濃度的升高，表達(dá)量逐漸下降；而A498和DU145細(xì)胞中的EZH2蛋白并沒有此種變化，說明不同細(xì)胞對(duì)于氧化鋅顆粒的反應(yīng)性的不一致。其他三種酶類蛋白，如 CBP 蛋白，在三種細(xì)胞中表達(dá)量基本不受氧化鋅顆粒影響；LSD1 和 HDAC1 蛋白雖然與空白組存在差異，但由于沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異或并沒有顯示出與氧化鋅顆粒的濃度依賴關(guān)系，所以并沒有納入下一步的研究范圍中。在蛋白水平檢測(cè)出四種酶類物質(zhì)相應(yīng)的變化后，我們又在轉(zhuǎn)錄水平加以驗(yàn)證（圖1.3B)。結(jié)果顯示：T24 細(xì)胞中 EZH2 的 mRNA 也濃度依賴性的變化，即隨著氧化鋅顆粒濃度的升高，表達(dá)量逐漸下降；其余酶類 mRNA 水平與空白對(duì)照相比并無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果與蛋白水平檢測(cè)結(jié)果基本一致，證明 T24細(xì)胞中 EZH2 基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平受氧化鋅濃度的影響，且與濃度呈負(fù)相關(guān)。圖 1.3：4 種組蛋白酶在氧化鋅顆粒暴露 48h 后的表達(dá)水平T24


本文編號(hào)：3625937