基因治療是通過導(dǎo)入正�；騺砑m正缺陷或異常基因,而基因治療過程所需的理想載體須具有安全性和高效性,但現(xiàn)有載體很難平衡安全性與高效性。支鏈分子量為25kDa的聚乙烯亞胺因其“質(zhì)子海綿效應(yīng)”、高轉(zhuǎn)染效率以及攜帶遺傳物質(zhì)容量大使其成為最有潛力的應(yīng)用最廣泛的陽離子聚合物,但聚乙烯亞胺具有很高的毒性。本文以聚乙烯亞胺（PEI）和靶向細(xì)胞中CD44受體的透明質(zhì)酸（HA）為基礎(chǔ)材料構(gòu)建的DNA納米載體以期望實(shí)現(xiàn)高效、低毒、靶向性。將聚乙烯亞胺（PEI）和透明質(zhì)酸（HA）分別與能表達(dá)綠色熒光蛋白的pDNA和分子量152kb的病毒型雙鏈DNA通過靜電自組裝制備PEI/pDNA（DNA）/HA三元復(fù)合物納米載體,通過DLS和透射電鏡對(duì)制備的納米載體進(jìn)行粒徑、電位和形貌的表征,凝膠電泳實(shí)驗(yàn)表征納米載體對(duì)DNA的裝載作用,進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)觀察有無綠色熒光蛋白的表達(dá)。制備PEI/pDNA/HA三元復(fù)合物納米載體的最優(yōu)條件為將負(fù)電荷組分溶液加入pH為7.4正電荷組分溶液中,PEI的濃度為0.5 mg/mL,HA的濃度為0.2 mg/mL。制備的納米載體粒徑分布在100²00 nm,TEM觀察到直... 

【文章來源】：湖北工業(yè)大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 基因治療
        1.1.1 基因治療概述
        1.1.2 蛋白表達(dá)概述
    1.2 載體進(jìn)入細(xì)胞的過程
    1.3 陽離子聚合物概述
        1.3.1 陽離子聚合物的分類
        1.3.2 陽離子聚合物的性質(zhì)
        1.3.3 陽離子聚合物的生物活性
        1.3.4 陽離子聚合物的不同結(jié)構(gòu)形態(tài)
    1.4 DNA納米載體發(fā)展及現(xiàn)狀
    1.5 本論文選題依據(jù)、內(nèi)容、意義及方法
        1.5.1 PEI/pDNA/HA三元復(fù)合物納米載體的制備
        1.5.2 PEI/DNA/HA三元復(fù)合物納米載體的制備
        1.5.3 PEI/pDNA/HA-mPEG三元復(fù)合物納米載體的制備
        1.5.4 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC三元復(fù)合物納米載體的制備
第2章 PEI/pDNA/HA三元復(fù)合物納米載體的制備與表征
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 儀器
        2.2.3 PEI/pDNA/HA納米載體的制備
        2.2.4 電泳實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 體外基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 PEI-Rh標(biāo)記
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 不同的影響因素對(duì)納米載體粒徑電位以及穩(wěn)定性的影響
        2.3.2 通過紅外光譜對(duì)聚乙烯亞胺和透明質(zhì)酸進(jìn)行表征
        2.3.3 電泳實(shí)驗(yàn)表征
        2.3.4 PEI-Rh標(biāo)記紫外檢測(cè)
        2.3.5 PEI-Rh熒光表征
        2.3.6 體外轉(zhuǎn)染部分結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第3章 PEI/DNA/HA三元復(fù)合物納米載體的制備與表征
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 儀器
        3.2.3 PEI/DNA/HA納米載體的制備
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 不同配方下的納米載體的制備及表征
        3.3.2 電泳表征
    3.4 本章小結(jié)
第4章 PEI/pDNA/HA-mPEG三元復(fù)合物納米載體的制備與表征
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 儀器
        4.2.3 PEI/pDNA/HA-mPEG納米載體的制備
        4.2.4 電泳實(shí)驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 HA-mPEG的紅外光譜表征
        4.3.2 PEI/pDNA/HA-mPEG納米載體的DLS和電鏡表征
        4.3.3 PEI/pDNA/HA-mPEG納米載體的凝膠電泳表征
    4.4 本章小結(jié)
第5章 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC三元復(fù)合物納米載體的制備與表征
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 儀器
        5.2.3 制備PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC納米復(fù)合物
        5.2.4 電泳實(shí)驗(yàn)
        5.2.5 BSA吸附實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 合成HA-PEG-PTMC的紅外表征
        5.3.2 三元復(fù)合物PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC的DLS與電鏡表征
        5.3.3 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC納米載體的凝膠電泳表征
        5.3.4 PEI/pDNA/HA-PEG-PTMC納米載體BSA吸附表征
    5.4 本章小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]陽離子納米聚合物的合成、表征及其抗菌性研究[J]. 肖先森,劉鶴籌,溫青,楊樂敏,王正輝.  功能材料. 2015(22)
[2]基因治療載體的研究進(jìn)展[J]. 王保琳.  淮海醫(yī)藥. 2011(02)

博士論文
[1]納米載體輸送核酸藥物分子用于癌癥治療的研究[D]. 劉熙秋.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3529817