背景納米銀廣泛應(yīng)用于紡織品、化妝品及醫(yī)療用品等方面,可經(jīng)皮膚接觸、呼吸道、消化道等多種途徑進(jìn)入機(jī)體,增加了機(jī)體暴露于納米銀的風(fēng)險(xiǎn)。納米銀作為抗菌敷料在臨床上創(chuàng)傷表面的應(yīng)用較多,然而其潛在的應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)尚存在爭(zhēng)議。目的檢測(cè)低濃度納米銀暴露對(duì)大鼠乳鼠皮膚成纖維細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞增殖及細(xì)胞內(nèi)沉積的影響,為皮膚創(chuàng)傷愈合過程中納米銀的安全應(yīng)用提供理論參考。方法1.利用組織貼塊法分別取大鼠乳鼠背部和尾尖部的皮膚組織,原代培養(yǎng)皮膚成纖維細(xì)胞;常規(guī)傳代培養(yǎng)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞;用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。2.MTT法檢測(cè)不同濃度梯度的納米銀溶液孵育皮膚成纖維細(xì)胞（20-10000ng/ml）和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（20-5000 ng/ml）后的細(xì)胞存活率。3.選用不同終濃度的納米銀溶液分別孵育皮膚成纖維細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,在不同的作用時(shí)間點(diǎn),倒置顯微鏡觀察活細(xì)胞形態(tài),電子顯微鏡觀察納米銀在皮膚成纖維細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞內(nèi)的沉積。4.選用終濃度為20 ng/ml、200 ng/ml、2000 ng/ml的納米銀溶液孵育皮膚成纖維細(xì)胞48 h,提取DNA,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA有無(wú)片段化。5.選用終濃度為20... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

皮膚成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)Fig.1Thecultureofskinfibroblastsinvitro

圖 2 免疫熒光染色示皮膚成纖維細(xì)胞 Vimentin 表達(dá)Fig.2 Immunofluorescence staining showed the expression of vimentin in skin fibroblasts 2 示免疫熒光染色示皮膚成纖維細(xì)胞 Vimentin 表達(dá)。A: 紅色 CY3 標(biāo)記的 Vimentin，示背部來(lái)源的傳代成纖胞，表達(dá) Vimentin 陽(yáng)性；B: 藍(lán)色為 DAPI 標(biāo)記的背部來(lái)源的傳代成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核；C: A 圖和 B 圖的疊果；D:紅色 CY3 標(biāo)記的 Vimentin，示尾尖部來(lái)源的傳代成纖維細(xì)胞，表達(dá) Vimentin 陽(yáng)性；E: 藍(lán)色為 DAPI的尾尖部來(lái)源的傳代成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核；圖 F:D 圖和 E 圖的疊加效果。標(biāo)尺為 100 μm。ig.2 Immunofluorescence staining showed the expression of vimentin in skin fibroblasts from the back and tail ofew-born rat. A: Immunofluorescent staining of skin fibroblasts from the back, CY3 labeled Vimentin was shown in : Blue indicated the nuclear of skin fibroblasts from the back stained by DAPI. C: The superimposed effects came fhart A and B. D: Immunofluorescent staining of skin fibroblasts from the tail, CY3 labeled Vimentin was shown in : Blue indicated the nuclear of skin fibroblasts from the tail stained by DAPI. C: The superimposed effects came fhart D and E. Scale bar=100 μm.

‐0.400.40.81.21.620 50 100 200 500 1000 2000 5000 10000eRlative elcl viabitylConc. of AgNPs, ng/ml圖 3 MTT 法測(cè)定不同濃度梯度的納米銀孵育皮膚成纖維細(xì)胞 48 h 后的相對(duì)存活率Fig.3 MTT assay measured the relative cell viability of skin fibroblasts incubated by different concentration gradient ofsilver nanoparticles for 48 h** P<0.01, 5000 ng/ml、10000 ng/ml 組與 20 ng/ml 組相比；*P<0.05, 2000 ng/ml 組與 20 ng/ml 組相比。誤差線代表標(biāo)準(zhǔn)誤（n=4）。** P<0.01, 5000 ng/ml and 10000 ng/ml silver nanoparticles groups compared to 20 ng/ml silver nanoparticles group; *P<0.05, 2000 ng/ml silver nanoparticles group compared to 20 ng/ml silver nanoparticles group. Standard bar meansstandard error (n=4).

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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