本文關(guān)鍵詞：不同特性羥基磷灰石納米粒子抑制胃癌細胞生長的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：羥基磷灰石(hydroxyapatite)材料因其優(yōu)異的生物相容性而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域,近年來有研究發(fā)現(xiàn)羥基磷灰石納米粒子(hydroxyapatite nanoparticles, HAPNs)可抑制多種類型的腫瘤細胞生長,表現(xiàn)出抗腫瘤活性。但是,關(guān)于粒子形貌、大小、表面電荷以及比表面積等材料特性對其抗腫瘤活性的影響,尚缺乏系統(tǒng)研究。采用微波法和液相法制備了多批HAPNs,以人胃癌細胞MGC80-3為對象,通過MTT法檢測粒子的細胞毒性,考察不同的材料合成與處理條件對粒子抗腫瘤活性的影響。對于微波法,在一定范圍內(nèi),改變微波功率、凍干時間與熱處理方法可影響粒子的細胞毒性,而不同的干燥方法以及結(jié)晶度差異對其細胞毒性沒有顯著影響。對于液相法,不同的清洗方式與聚乙二醇分散劑的添加未能影響粒子的細胞毒性,但熱處理可提高HAPNs的抗腫瘤活性。我們挑選了微波合成功率分別為200和300 W、經(jīng)冷凍干燥制備的粒子L200和M300,以及200 W微波功率合成后經(jīng)550℃熱處理得到的C200粒子,研究粒子特性對抗腫瘤活性的影響。特性表征發(fā)現(xiàn)這三種HAPNs的形貌、大小與比表面積等性質(zhì)各不相同,進一步的體外細胞研究表明,三種粒子可對MGC80-3細胞產(chǎn)生不同程度的細胞毒性,其中L200的細胞毒性最強。細胞核形態(tài)觀察和Annexin V-FITC/PI雙染色檢測結(jié)果表明,三種粒子均可引發(fā)MGC80-3發(fā)生細胞凋亡,且L200誘導(dǎo)細胞凋亡的比例高于C200和M300粒子。在細胞攝取三種粒子的研究中發(fā)現(xiàn),與C200和M300相比,MGC80-3能更高效和快速地攝取L200粒子,依賴窖蛋白的胞吞作用是細胞攝取三種粒子的主要途徑。通過激光共聚焦顯微鏡觀察粒子在胞內(nèi)的分布,發(fā)現(xiàn)三種粒子均聚集在胞質(zhì)中,而L200粒子則有部分被轉(zhuǎn)運至細胞核中。此外,三種粒子均能導(dǎo)致胞內(nèi)鈣離子濃度上升40%以上,而L200的作用最強,能使胞內(nèi)鈣離子濃度達到正常細胞水平的1.8倍。研究結(jié)果表明,納米粒子的形貌、大小、表面電荷等材料特性相互關(guān)聯(lián),這些特性影響了粒子與細胞間的相互作用,調(diào)控其細胞攝取以及胞內(nèi)轉(zhuǎn)運和代謝,進而引發(fā)了不同程度的細胞凋亡和細胞毒性。
【關(guān)鍵詞】：羥基磷灰石納米粒子 胃癌細胞 細胞毒性 材料特性
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R73-36;TB383.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-21
• 1.1 羥基磷灰石納米粒子的細胞毒性機理10-12
• 1.2 羥基磷灰石納米粒子特性對其細胞毒性的影響12-13
• 1.3 納米材料的細胞毒性研究進展13-19
• 1.3.1 表面特性對細胞毒性的影響13-15
• 1.3.2 攝取與胞內(nèi)轉(zhuǎn)運對細胞毒性的影響15-17
• 1.3.3 細胞毒性機理研究進展17-19
• 1.4 論文的研究目的、內(nèi)容以及意義19-21
• 1.4.1 研究目的19
• 1.4.2 研究內(nèi)容19-20
• 1.4.3 研究意義20-21
• 第2章 材料與方法21-33
• 2.1 實驗材料21-26
• 2.1.1 細胞與羥基磷灰石納米粒子21
• 2.1.2 實驗耗材21-22
• 2.1.3 實驗試劑22-23
• 2.1.4 儀器與設(shè)備23-24
• 2.1.5 試劑配制24-26
• 2.2 實驗方法26-33
• 2.2.1 羥基磷灰石納米粒子的制備26-27
• 2.2.2 HAPNs熒光標記27
• 2.2.3 HAPNs特性表征27-28
• 2.2.4 細胞培養(yǎng)28-29
• 2.2.5 細胞培養(yǎng)實驗器材滅菌29
• 2.2.6 細胞毒性評價29-30
• 2.2.7 細胞核染色30
• 2.2.8 流式細胞儀檢測粒子攝取30-31
• 2.2.9 流式細胞儀檢測細胞凋亡31-32
• 2.2.10 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察32
• 2.2.11 胞內(nèi)鈣離子濃度檢測32-33
• 第3章 合成方法對羥基磷灰石納米粒子抗腫瘤活性的影響33-40
• 3.1 微波法中不同合成與處理條件的影響33-36
• 3.1.1 微波功率的影響33-34
• 3.1.2 干燥方法以及熱處理的影響34-35
• 3.1.3 冷凍干燥時間的影響35
• 3.1.4 球磨處理的影響35-36
• 3.1.5 不同結(jié)晶程度的影響36
• 3.2 液相沉淀法中不同合成與處理條件的影響36-38
• 3.2.1 清洗方式與熱處理的影響36-37
• 3.2.2 凍干保護劑的影響37-38
• 3.3 討論38-40
• 第4章 粒子特性對HAPNs抗腫瘤活性的影響40-55
• 4.1 HAPNs特性表征40-44
• 4.1.1 X射線衍射檢測40-41
• 4.1.2 拉曼光譜分析41
• 4.1.3 透射電鏡表征41-42
• 4.1.4 比表面積分析42-43
• 4.1.5 表面電荷分析43
• 4.1.6 在懸浮液中的團聚狀態(tài)檢測43-44
• 4.2 不同特性HAPNs對腫瘤細胞的毒性44
• 4.3 不同特性HAPNs誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡44-46
• 4.3.1 細胞核形態(tài)檢測44-45
• 4.3.2 細胞凋亡檢測45-46
• 4.4 腫瘤細胞對不同特性HAPNs的攝取46-49
• 4.4.1 攝取動力學(xué)47-48
• 4.4.2 細胞攝取途徑48-49
• 4.5 不同特性的HAPNs在腫瘤細胞內(nèi)的分布定位49-50
• 4.6 不同特性HAPNs對腫瘤細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響50
• 4.7 討論50-55
• 第5章 結(jié)論與展望55-57
• 5.1 結(jié)論55-56
• 5.2 展望56-57
• 參考文獻57-70
• 致謝70

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本文編號：344176