納米載體攜載化療藥物用于抗腫瘤是目前腫瘤治療研究中的熱點(diǎn)。納米載體用于腫瘤治療有許多的優(yōu)點(diǎn),它不僅可以對(duì)水溶性較差的化療藥物起到很好的增溶效果,同時(shí)通過(guò)接枝靶向基團(tuán)和具有刺激響應(yīng)性化學(xué)鍵,能使抗腫瘤納米載體實(shí)現(xiàn)藥物靶向傳遞的同時(shí)也能使藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)可控釋放。傳統(tǒng)的納米載體往往只具有單一的刺激響應(yīng)性或者單一的靶向效果,而體內(nèi)真實(shí)的環(huán)境相對(duì)復(fù)雜,單一的刺激響應(yīng)往往不能使納米顆粒在進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后快速地響應(yīng)細(xì)胞內(nèi)或者外加的刺激,故無(wú)法實(shí)現(xiàn)藥物快速釋放。同時(shí),隨著抗腫瘤研究的深入,納米靶向載體的研究也逐漸地從靶向細(xì)胞層面向細(xì)胞器層面深入。本論文旨在構(gòu)建多靶向及多刺激響應(yīng)的聚合物納米載體,并考察其相關(guān)性能,體外釋放藥物以及體外和體內(nèi)抗腫瘤效果。本論文第二章,我們采用具有二硫鍵的單保護(hù)胱胺開(kāi)環(huán)聚合己內(nèi)酯,將二硫鍵高效地引入到高分子聚合物中,避免了傳統(tǒng)接枝響應(yīng)基團(tuán)接枝率不高的問(wèn)題。之后通過(guò)縮合反應(yīng),成功合成了具有PBA靶向的PEG-SS-PCL,抗腫瘤藥物DOX則通過(guò)酸不穩(wěn)定腙鍵鏈接在兩親性高分子的疏水端。體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)表明,膠束在雙重刺激條件下,膠束結(jié)構(gòu)的變化最終導(dǎo)致了藥物的快速釋放。通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察,具有靶向雙響應(yīng)的膠束能更多地被腫瘤細(xì)胞所內(nèi)吞,進(jìn)入細(xì)胞之后,在細(xì)胞內(nèi)pH刺激和GSH刺激下,藥物能快速地從膠束中釋放。空白材料對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞都幾乎無(wú)毒,而載藥膠束中,具有靶向和雙響應(yīng)的PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束在靶向作用和雙響應(yīng)刺激下,具有最好的抗腫瘤效果。最后,通過(guò)荷H22腫瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)一步的說(shuō)明PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束能更好地靶向腫瘤組織,取得了最好的抗腫瘤效果。組織學(xué)層面,通過(guò)HE染色和TUNEL染色,表明了空白材料對(duì)腫瘤細(xì)胞無(wú)殺害,而PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束則具有最好的抗腫瘤效果。在論文第三章,我們?cè)O(shè)計(jì)出了能逐步響應(yīng)環(huán)境刺激,同時(shí)協(xié)同了化療和光動(dòng)力治療的刺激響應(yīng)型納米膠束。DLS結(jié)果顯示膠束在酸性環(huán)境和還原性環(huán)境下,膠束粒徑有所變化。高效液相色譜(HPLC)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí),膠束在酸性環(huán)境,首先斷裂出前藥小分子PBA-SS-CPT,之后在GSH刺激下,進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成CPT。細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞流式結(jié)果顯示原卟啉能通過(guò)光化學(xué)內(nèi)在化作用增強(qiáng)膠束的內(nèi)吞。載藥膠束的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示,由于光敏劑PpIX的存在,光照會(huì)增加Dex-g-PpIX-g-PBA-SS-CPT(DPPSC)膠束的細(xì)胞毒性,同時(shí),由于膠束逐步地響應(yīng)細(xì)胞內(nèi)外的環(huán)境,導(dǎo)致了藥物的高效釋放,從而導(dǎo)致了細(xì)胞毒性的增加。短時(shí)的光照能促進(jìn)整個(gè)膠束逃逸溶酶體,同時(shí),由于溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境,PBA-SS-CPT能很好的從膠束中脫落,然后進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。利用了多種共定位分析方法對(duì)細(xì)胞的CLSM圖進(jìn)行定量和定性分析,結(jié)果表明DPPSC膠束在細(xì)胞中逐步響應(yīng)釋放藥物。進(jìn)一步通過(guò)HPLC檢測(cè),定性和定量的驗(yàn)證了 PBA-SS-CPT在細(xì)胞質(zhì)中能更好的轉(zhuǎn)化成CPT。用膠束和裸藥進(jìn)行荷PANC-1腫瘤裸鼠治療后,DPPSC膠束組在2種不同策略光照下,小鼠腫瘤生長(zhǎng)最慢,小鼠體重變化不大,并且整組小鼠存活時(shí)間最長(zhǎng)。治療末期取出小鼠腫瘤做組織學(xué)切片。通過(guò)HE染色和TUNEL染色證明了材料的安全性以及DPPSC膠束組在2種策略光照下,腫瘤細(xì)胞凋亡最明顯,從組織學(xué)層面說(shuō)明了 DPPSC膠束的藥效。在論文最后一章,成功合成出以四氧化三鐵作磁靶向,三苯基膦陽(yáng)離子(TPP)作為線粒體靶向,DOX作為化療藥物結(jié)合聚多巴胺(PDA)熱療的納米顆粒。近紅外成像結(jié)果顯示,包裹多巴胺的顆粒,在光照6分鐘后,溫度快速的升高了 18度以上。DOX的釋藥實(shí)驗(yàn)表明,酸性條件下DOX的釋放快于中性條件,同時(shí),NIR光照下,DOX的釋放明顯加快。細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,空白材料對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,但在NIR光照射條件下,材料的細(xì)胞毒性增加,由于二硫鍵的斷裂,TPP靶向線粒體,促使對(duì)熱敏感的腫瘤細(xì)胞線粒體的破壞,加速了腫瘤細(xì)胞的凋亡,因此Fe3O4@PDA-TPP/-SS-mPEG和Fe3O4@PDA-TPP/-mPEG的細(xì)胞毒性出現(xiàn)顯著差異。與此同時(shí),通過(guò)活死細(xì)胞熒光染色也能觀察到,只有光照區(qū)域的細(xì)胞才會(huì)死亡。細(xì)胞CLSM圖顯示只有二硫鍵連接的mPEG才能從納米顆粒上掉落下來(lái),從而暴露出TPP靶向單元,進(jìn)而靶向線粒體,熒光的共定位分析結(jié)果也進(jìn)一步說(shuō)明了這一點(diǎn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在光照情況下,雙靶向光熱療結(jié)合化療組小鼠腫瘤增長(zhǎng)最緩慢,小鼠體重?zé)o明顯變化,并且小鼠存活率最高,說(shuō)明該顆粒更好地抑制腫瘤增長(zhǎng)同時(shí)具有高的安全性。
【學(xué)位單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ460.1;TB383.1
【部分圖文】：

ＤＯＸ部分釋放。之后，膠束進(jìn)一步進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中過(guò)量ＧＳＨ刺激下，逡逑膠束中二硫鍵斷裂，膠束徹底解體，藥物快速釋放。釋放的ＤＯＸ?cái)U(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞逡逑核并殺滅腫瘤細(xì)胞（圖１．２）。Ｌｉ等采用一鍋法制備了苯丙氨酸二肽為基礎(chǔ)，天逡逑然海藻酸二醛作為交聯(lián)劑誘導(dǎo)苯丙氨酸二肽自組裝并原位還原金離子成金納米逡逑顆粒的雜化納米球。該雜化納米球在細(xì)胞內(nèi)的ｐＨ和ＧＳＨ刺激下，能快速的解體逡逑成小顆粒，進(jìn)而藥物在細(xì)胞中快速釋放，達(dá)到殺滅腫瘤的目的。Ｌｖ等開(kāi)發(fā)了逡逑一種新型接枝紫杉醇的高分子前藥，該前藥以二硫代二丙酸為側(cè)鏈鏈接劑通過(guò)逡逑酯鍵鏈接藥物和主鏈高分子，因此該高分子前藥同時(shí)具有ｐＨ和ＧＳＨ刺激釋藥。逡逑Ｗａｎｇ等［５６］為了增加腫瘤細(xì)胞的內(nèi)在化以及細(xì)胞內(nèi)的藥物快速釋藥，制備了ｐＨ逡逑和ＧＳＨ雙重刺激響應(yīng)的聚合物脂質(zhì)體囊泡

￣邐＾＊＾９＊邋Ｌ邋（ｇ＾邋ｔ）逡逑圖１．３邋ＰＢＡ－ＰＥＧ－ＳＳ－ＰＣＬ－ｈｙｄ－ＤＯＸ膠束靶向基團(tuán)介導(dǎo)的內(nèi)吞以及膠束在細(xì)胞內(nèi)逡逑的刺激響應(yīng)釋藥的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．３邋ＰＢＡ邋Ｌｉｇａｎｄ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ邋Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ邋ｏｆ邋ＰＢＡ－ＰＥＧ－ＳＳ－ＰＣＬ－ｈｙｄ－ＤＯＸ逡逑Ｐｏｌｙｍｅｒ邋Ｍｉｃｅｌｌｅｓ邋ａｎｄ邋Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ，邋Ｐｒｏｍｐｔ邋Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ邋Ｄｒｕｇ邋Ｒｅｌｅａｓｅ邋Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ邋ｂｙ逡逑ＧＳＨ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋Ａｃｉｄｉｃ邋Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ逡逑（２）制備了以化療藥物ＣＰＴ和光敏劑ＰｐＩＸ為疏水端，葡聚糖Ｄｅｘ做親水端的復(fù)逡逑合膠束。該膠束可以逐步響應(yīng)腫瘤細(xì)胞的亞細(xì)胞微環(huán)境，同時(shí)聯(lián)合了光動(dòng)力治療逡逑和化療（圖１．４）。系統(tǒng)研宄了該體系的逐步響應(yīng)行為、生物相容性、光化學(xué)內(nèi)在逡逑化、細(xì)胞毒性、光動(dòng)力產(chǎn)生活性氧、并進(jìn)行了體內(nèi)抗腫瘤活性研宄。逡逑Ｓｈｏｒｔ邋ｌｉｇｈｔ邋＊，Ｌｏｎｇ邋ｌｉｇｈｔ邐ｒ逡逑ｖｉａｔｉｏｎ邐ＩＶ0ｅａｔｈ逡逑？r>＾邐＇NB逡逑氣里、Ｔ邋ｔ：逡逑Ｅｎｄｏ／Ｌｙｓｏｓｏｍｅ邋＾逡逑圖１．４膠束程序性釋放藥物用于增強(qiáng)藥物的化療和光動(dòng)力治療的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｇｒ

（２）制備了以化療藥物ＣＰＴ和光敏劑ＰｐＩＸ為疏水端，葡聚糖Ｄｅｘ做親水端的復(fù)逡逑合膠束。該膠束可以逐步響應(yīng)腫瘤細(xì)胞的亞細(xì)胞微環(huán)境，同時(shí)聯(lián)合了光動(dòng)力治療逡逑和化療（圖１．４）。系統(tǒng)研宄了該體系的逐步響應(yīng)行為、生物相容性、光化學(xué)內(nèi)在逡逑化、細(xì)胞毒性、光動(dòng)力產(chǎn)生活性氧、并進(jìn)行了體內(nèi)抗腫瘤活性研宄。逡逑Ｓｈｏｒｔ邋ｌｉｇｈｔ邋＊，Ｌｏｎｇ邋ｌｉｇｈｔ邐ｒ逡逑ｖｉａｔｉｏｎ邐ＩＶ0ｅａｔｈ逡逑？r>＾邐＇NB逡逑氣里、Ｔ邋ｔ：逡逑Ｅｎｄｏ／Ｌｙｓｏｓｏｍｅ邋＾逡逑圖１．４膠束程序性釋放藥物用于增強(qiáng)藥物的化療和光動(dòng)力治療的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ邋ｒｅｌｅａｓｅ邋ｆｏｒ邋ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ邋ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ邋ａｎｄ逡逑ＰＤＴ．逡逑

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本文編號(hào)：2827132