【摘要】：本論文致力于研究具有腫瘤靶向、PET成像和抗癌藥物可控性釋放等多功能一體化的納米藥物體系,納米藥物載體用PET同位素~(64)Cu標(biāo)記后靶向輸送至腫瘤部位,實(shí)現(xiàn)腫瘤的診斷與治療。所制備的多功能納米診療體系作為一種高效、低毒的納米載體在腫瘤靶向治療和腫瘤診斷中具有了良好的應(yīng)用前景,為開發(fā)出可用于臨床診斷兼治療的多功能腫瘤靶向納米遞釋系統(tǒng)提供研究基礎(chǔ)。具體的研究?jī)?nèi)容如下:1.構(gòu)建多功能納米體系。樹枝狀大分子PAMAM-OH作為結(jié)構(gòu)主體,在其表面共價(jià)連接聚乙二醇(PEG)親水鏈和聚天冬氨酸(PBLA)疏水鏈,在PEG的外端連接F3多肽靶向配體,同時(shí)在PEG鏈上連接雙功能螯合劑(NODA),用正電子核素~(64)Cu(t_(1/2)=12.7h)進(jìn)行標(biāo)記;此外,通過(guò)具有pH敏感性的腙鍵共價(jià)連接腫瘤治療藥物阿霉素(DOX)于PBLA上。最終獲得樹枝狀兩親性嵌段共聚物PAMAM-P(LA-Hyd-DOX)-b-PEG-OCH_3/F3/NODA,簡(jiǎn)寫為PAMAM-DOX-F3。采用~1H-NMR進(jìn)行其結(jié)構(gòu)表征;通過(guò)凝膠滲透色譜法(GPC)測(cè)定聚合物的分子量。2.對(duì)所制備的單分子膠束形貌、載藥量、釋藥及穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。通過(guò)透射電子顯微鏡(TEM)和動(dòng)態(tài)激光散射(DLS)測(cè)定結(jié)果表明該膠束為規(guī)整球形,直徑在20-37nm范圍內(nèi);UV紫外檢測(cè)法測(cè)定單分子膠束的DOX載藥含量為16.5wt%;并通過(guò)DOX釋放累積量對(duì)pH響應(yīng)機(jī)制進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果顯示在pH=5.3的條件下釋放累積量高達(dá)80%而pH=7.4的條件下釋放累積量?jī)H僅只有16%,這體現(xiàn)了DOX與PAMAM聚合物載體通過(guò)酸不穩(wěn)定腙鍵偶聯(lián)后具有pH敏感的藥物釋放能力;在模擬生理穩(wěn)定性試驗(yàn)中,結(jié)果顯示21天形態(tài)無(wú)變化,表明該納米膠束具有良好的穩(wěn)定性。3.采用流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦熒光顯微鏡,對(duì)單分子膠束進(jìn)行體外細(xì)胞生物學(xué)活性考察,結(jié)果顯示靶向單分子膠束(PAMAM-DOX-F3)比非靶向單分子膠束(PAMAM-DOX)更易聚積在MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞中,表明PAMAM-DOX-F3靶向分子膠束具有靶向效應(yīng)。此外,對(duì)MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞毒性分析證實(shí)PAMAM-DOX-F3靶向單分子膠束具有更強(qiáng)的內(nèi)化作用,也表明其具有腫瘤細(xì)胞靶向性。4.對(duì)正電子發(fā)射同位素~(64)Cu標(biāo)記PAMAM單分子膠束進(jìn)行體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià),攜帶MDA-MB-231腫瘤的小鼠體內(nèi)進(jìn)行正電子發(fā)射斷層掃描(PET)成像監(jiān)測(cè)。在24小時(shí)內(nèi),PET成像顯示~(64)Cu-PAMAM-DOX-F3在MDA-MB-231腫瘤中的攝取為6.1±1.2%ID/g,明顯高于~(64)Cu-PAMAM-DOX的攝取2.5±0.4%ID/g,而膠束在其他器官或組織中的攝取分布特征中無(wú)明顯差別,這些說(shuō)明了靶向納米膠束具有在腫瘤部位強(qiáng)效而持久的攝取能力。另外,離體熒光成像也顯示腫瘤部位攝取F3靶向單分子膠束的熒光強(qiáng)于攝取非靶向單分子膠束的熒光,說(shuō)明PAMAM單分子膠束可以有效地遞送DOX到腫瘤區(qū)域。此外,心臟部位無(wú)DOX熒光。
【學(xué)位授予單位】：武漢理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TB383.1;R73-3
【圖文】：

2.1 引言藥物載體的設(shè)計(jì)對(duì)于增加藥物的負(fù)載量，增強(qiáng)特異性靶向，降低非特異性的聚集有著重要的意義。根據(jù)高分子前藥的設(shè)計(jì)理念通過(guò)合成制備了樹枝狀兩親性嵌段共聚物 PAMAM-P(LA-Hyd-DOX)-b-PEG-OCH3/F3/NODA，為多功能納米載體的構(gòu)建奠定基礎(chǔ)�？紤]到 PAMAM 表面含有中性或陰離子基團(tuán)時(shí)，如羥基或羧基可以表現(xiàn)出低毒性并且可以形成表面大量的支鏈，本課題選用聚（酰胺胺）樹枝狀聚合物（PAMAM-OH）為樹枝狀嵌段共聚物的核心。在本研究中先將 PAMAM-OH 端基羧基化，再由-COOH 與兩親性嵌段聚合物的端基（-NH2）成酰胺形成樹枝狀兩親性載體（PAMAM-PBLA-PEG-OCH3/Mal），DOX 通過(guò)腙鍵與該共聚物偶聯(lián)。最后，在親水 PEG 鏈外端連接靶向配體 F3 多肽，同時(shí)連接雙功能螯合劑（P-NCS-benzyl-NODA-GA）(NODA)，最終得到樹枝狀兩親性前藥 PAMAM-P(LA-

LA-NCA 的合成路線如圖 2-2 所示。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，溶解在 10 mL 干燥的 THF 溶液中于 50 ℃反應(yīng) 30 條件下反應(yīng) 1 小時(shí)。真空除去 1/3 溶劑，再加入 30晶析出并冷藏在 4 ℃環(huán)境下靜置 12 小時(shí)，抽濾收加入30 mL乙酸乙酯溶液使其充分溶解并用0.5％硫酸鎂干燥 4 小時(shí)，過(guò)濾收集最終產(chǎn)物并真空干燥b-PEG-OCH3/Mal 的制備圖 2-3 化合物 PBLA-b-PEG-OCH3/Mal 的合成

LA-NCA 的制備[93]圖 2-2 化合物 BLA-NCA 的合成物 BLA-NCA 的合成路線如圖 2-2 所示。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，2 g BLACI3)2溶解在 10 mL 干燥的 THF 溶液中于 50 ℃反應(yīng) 30 分鐘，待在該條件下反應(yīng) 1 小時(shí)。真空除去 1/3 溶劑，再加入 30 mL 正己有結(jié)晶析出并冷藏在 4 ℃環(huán)境下靜置 12 小時(shí)，抽濾收集結(jié)晶物物中加入30 mL乙酸乙酯溶液使其充分溶解并用0.5％碳酸氫鈉無(wú)水硫酸鎂干燥 4 小時(shí)，過(guò)濾收集最終產(chǎn)物并真空干燥得到白BLA-b-PEG-OCH3/Mal 的制備

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本文編號(hào)：2750990